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zhouxw1987鐵蟲(chóng) (初入文壇)
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[求助]
新手提RNA，電泳圖看不懂
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今天第一次提RNA，用普通瓊脂糖凝膠1.6%，電壓為180V，跑了電泳圖，看不懂是啥意思，最下面那個(gè)很亮的地方是什么東西？是降解了么？但是又不像是拖帶��？請(qǐng)各位前輩指點(diǎn)指點(diǎn)，能用此RNA做反轉(zhuǎn)錄么？萬(wàn)分感謝！![](\"https://muchongimg.xmcimg.com/data/edu/a1/ca/1528487_1324815338_320.jpg#opennewwindow\") 圖一、電泳5min時(shí)的圖片 ![](\"https://muchongimg.xmcimg.com/data/edu/a2/0b/1528487_1324815333_888.jpg#opennewwindow\") 圖二、電泳10min時(shí)的圖片 |
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 【分子生物】EPI帖 |
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【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★
wanhscn(金幣+3): 鼓勵(lì)完整應(yīng)助 2011-12-27 21:21:39
wanhscn(金幣+3): 鼓勵(lì)完整應(yīng)助 2011-12-27 21:21:39
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基因組DNA 0.6% gel 4-5v/cm gDNA大，要慢慢跑出來(lái)才漂亮。 1-5kb DNA 1%gel 5-8v/cm 隨便跑跑即可 200-500bp 2% 約6v/cm 問(wèn)題不大。 至于RNA電泳（普通瓊脂糖，非變性），因?yàn)榕滤娪緯r(shí)間過(guò)長(zhǎng)，降解，所以感覺(jué)上電泳時(shí)間控制在30min以?xún)?nèi)會(huì)比較好。 1-1.5%的膠都有人用， 7v/cm左右差不多，在溴酚蘭跑出來(lái)1-2cm。不同大小的點(diǎn)樣孔上不同的量（小孔建議200ng） 多跑幾次自己摸索摸索，找出自己最適合的條件。 |
9樓2011-12-26 11:21:06
haiven
捐助貴賓 (著名寫(xiě)手)
- MolEPI: 2
- 應(yīng)助: 18 (小學(xué)生)
- 金幣: 7057.7
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- 在線(xiàn): 291.5小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 237714
- 注冊(cè): 2006-04-04
- 性別: GG
- 專(zhuān)業(yè): 生物物理、生物化學(xué)與分子
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
西瓜(金幣+5, MolEPI+1): 180V確實(shí)偏高了。測(cè)OD是好方法，本人現(xiàn)在都直接測(cè)OD省略電泳了。 2011-12-28 12:52:32
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
西瓜(金幣+5, MolEPI+1): 180V確實(shí)偏高了。測(cè)OD是好方法，本人現(xiàn)在都直接測(cè)OD省略電泳了。 2011-12-28 12:52:32
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RNA電泳不宜跑太高的電壓，畢竟不是PCR產(chǎn)物。這個(gè)在每個(gè)實(shí)驗(yàn)室都會(huì)有個(gè)經(jīng)驗(yàn)值的，多問(wèn)問(wèn)，或者自己多摸索一下。 然后上樣之前，對(duì)RNA定量一下，很方便的，用NanoDrop，1-2uL就可以了，同時(shí)還可以看出你的RNA的質(zhì)量如何。這方面的資料很多了，你上網(wǎng)隨便搜搜就找得到的。做實(shí)驗(yàn)之前，要把這些原理和方法多了解，然后設(shè)計(jì)和計(jì)劃一下實(shí)驗(yàn)怎么做，這樣實(shí)驗(yàn)的效率也就高多了。 |
13樓2011-12-27 08:29:15
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
西瓜(金幣+5, MolEPI+1): Good！ 2011-12-26 11:44:04
zhouxw1987(金幣+2): ★★★很有幫助 2011-12-27 20:30:11
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
西瓜(金幣+5, MolEPI+1): Good！ 2011-12-26 11:44:04
zhouxw1987(金幣+2): ★★★很有幫助 2011-12-27 20:30:11
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首先你上樣量肯定有點(diǎn)多相對(duì)你此膠的點(diǎn)樣孔來(lái)說(shuō)。你小孔的膠先測(cè)一下OD，上200-300ng就可以了，上多了就會(huì)跑成這樣。 其次你的電泳可能有點(diǎn)大，10min跑了那么遠(yuǎn)，一般要了20-25min才能跑這樣的距離。電壓是以幾伏每厘米來(lái)說(shuō)的，不是以電泳儀顯示的總電壓來(lái)說(shuō)。電泳槽有10cm\20cm\30cm等等的規(guī)格，如果你是180v，則分別為18v/cm,9v/cm,6v/cm了，完全不同的概念。 最后，你的loading如果不是你點(diǎn)多了就是你的二甲苯青和溴酚蘭加多了，多到都有點(diǎn)影響判斷條帶了。6Xloading 你就按1：5跟你的樣品混混上就行了。新手最好也點(diǎn)個(gè)marker（DL2000） |
6樓2011-12-26 09:28:38
我是小純潔
金蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
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2樓2011-12-25 20:48:10
dnaxxx
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3樓2011-12-26 07:09:40
4樓2011-12-26 08:19:37
zhouxw1987
鐵蟲(chóng) (初入文壇)
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5xiaosh
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8樓2011-12-26 10:46:32
10樓2011-12-26 11:23:08
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