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[求助]
定量pcr的污染問題
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大家好！最近在做定量，但是不知道什么原因空白對照也出現(xiàn)擴(kuò)增。情況是這樣的：我用CDNA模板做了5個梯度稀釋，準(zhǔn)備先做標(biāo)準(zhǔn)曲線。出來的結(jié)果濃度大的3個模板擴(kuò)增曲線的ct值都相隔一定值，比較正常；濃度小的那2個曲線較接近了；而且那個空白對照也有擴(kuò)增。 我分析應(yīng)該不會是二聚體，因為溶解曲線只有一個峰，而且擴(kuò)增曲線隨著模板濃度的減小而后移。大覺覺得是這樣嗎？ 我先以為是氣溶膠污染，然后換了個地方做，還是有陰性擴(kuò)增 后來我去別人的實驗室做，用的人家的槍和實驗室，就沒有擴(kuò)增了 所以我覺得可能是我的槍污染了，我同學(xué)的實驗室不方便去了，我換了個從沒做過分子實驗的地方做，又換了我實驗室的別的槍做，還是有陰性擴(kuò)增 最后我買了那種帶濾膜的槍頭，不知道大家用過嗎？就是槍頭上有那種濾膜，說是可以防污染的，用了之后還是有陰性擴(kuò)增。 請問誰知道怎么辦��？或者幫我出出主意啊，我實在是沒辦法了，每次都有擴(kuò)增。謝謝大家?guī)兔Γ? |
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