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waldenpond金蟲 (著名寫手)
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[求助]
PCR后凝膠電泳條帶時有時無是怎么回事？
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我上個月底做了一次RT-PCR（逆轉(zhuǎn)錄半定量），做完之后跑了一次凝膠電泳，結(jié)果還湊合。 這兩天我又將提的RNA逆轉(zhuǎn)錄，PCR，跑電泳，卻發(fā)現(xiàn)其中幾個條帶沒有了（有幾條很暗，有幾條就直接沒有）。連續(xù)逆轉(zhuǎn)錄、PCR了兩次，結(jié)果都是如此。 其中有4條是內(nèi)參照（β-actin），卻只有兩條是正常的，其余兩條看著條帶很暗，幾乎沒有，內(nèi)參照應(yīng)該是恒量表達(dá)的，條帶無論何時應(yīng)該是同樣亮度，而且比較亮的。 還有4條是目的條帶。這4條條帶之前一次PCR還是有的，亮度也還可以，但是這一次卻只有一條有，其余幾條也是很暗，幾乎看不出來。 我想了又想，就是找不出是什么原因。1.凝膠電泳加樣的問題應(yīng)該可以排除，因為今天我跑了兩次結(jié)果都是這樣，加樣應(yīng)該不存在問題的。2.樣本的問題也應(yīng)該可以排除，因為上一次可以做出來。3.逆轉(zhuǎn)錄、PCR（所加引物和體系）的問題，好像不是，因為我連續(xù)做了兩次都出現(xiàn)了同樣的問題。 各位大俠幫忙看一下到底是什么問題啊。先謝謝了！  PS：電泳圖片是我用畫圖畫出來的，大體可以表示我的問題，各位大俠湊合著看吧，呵呵！ [ Last edited by waldenpond on 2011-4-20 at 08:51 ] |
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waldenpond
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