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[求助]
請教各位做植物轉(zhuǎn)基因的蟲子-關(guān)于PCR引物設(shè)計
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| 請教各位植物轉(zhuǎn)基因的高手高手高高手：小弟我找同學(xué)要了轉(zhuǎn)pCAMBIA1301 質(zhì)粒(空質(zhì)粒) 的擬南芥轉(zhuǎn)基因系。需要PCR擴增35S 啟動子，GUS 兩個外顯子，一個內(nèi)含子，還有NOS polyA 終止子部分；即從35S啟動子到NOS polyA 終止子 片段部分；全長一共2852bp, 打算一共分兩段擴增，第一段始于LacZ 的alpha 片段部分，終于GUS第二個外顯子的編碼區(qū)域，共1618bp；第二段始于GUS第二個外顯子的編碼區(qū)域，終于NOS PolyA 和右邊界之間的區(qū)域 （應(yīng)該也算內(nèi)含子吧），全長1649bp, 使用這兩對引物直接擴增pCAMBIA 1301 質(zhì)粒，效果非常好 （PCR 擴增片段長度和測序結(jié)果都很好），但使用這兩對引物擴增pCAMBIA1301 質(zhì)粒(空質(zhì)粒) 的擬南芥轉(zhuǎn)基因系，能擴增出片段，但長度不對，第一對引物擴增出的片段長度為 2000bp左右，而第二對擴增出的片段長度為1000bp左右，測序結(jié)果顯示，根本不是我想要的序列，請問這是什么原因？是不是我設(shè)計引物有哪個地方不對的？我應(yīng)該怎么做？？多謝多謝�。� |
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2樓2011-05-30 19:09:02
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