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[求助]
請教各位做植物轉基因的蟲子-關于PCR引物設計
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| 請教各位植物轉基因的高手高手高高手:小弟我找同學要了轉pCAMBIA1301 質粒(空質粒) 的擬南芥轉基因系。需要PCR擴增35S 啟動子,GUS 兩個外顯子,一個內含子,還有NOS polyA 終止子部分;即從35S啟動子到NOS polyA 終止子 片段部分;全長一共2852bp, 打算一共分兩段擴增,第一段始于LacZ 的alpha 片段部分,終于GUS第二個外顯子的編碼區(qū)域,共1618bp;第二段始于GUS第二個外顯子的編碼區(qū)域,終于NOS PolyA 和右邊界之間的區(qū)域 (應該也算內含子吧),全長1649bp, 使用這兩對引物直接擴增pCAMBIA 1301 質粒,效果非常好 (PCR 擴增片段長度和測序結果都很好),但使用這兩對引物擴增pCAMBIA1301 質粒(空質粒) 的擬南芥轉基因系,能擴增出片段,但長度不對,第一對引物擴增出的片段長度為 2000bp左右,而第二對擴增出的片段長度為1000bp左右,測序結果顯示,根本不是我想要的序列,請問這是什么原因?是不是我設計引物有哪個地方不對的?我應該怎么做??多謝多謝!! |
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[基金申請]
學校已經提交到NSFC,還能修改嗎?
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