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石頭影子2002木蟲 (正式寫手)
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[求助]
求助細(xì)胞分選純化方法
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| 老板說(shuō)流式和免疫磁珠分選細(xì)胞太貴了，有沒有簡(jiǎn)便實(shí)惠的方法？培養(yǎng)細(xì)胞為貼壁型，有沒有聽過(guò)抗體包被，怎么操作呢？有相關(guān)的方法嗎？初學(xué)這個(gè)，不懂請(qǐng)高手們指教。謝謝 |
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jhu132llh
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2樓2011-04-22 10:07:48
石頭影子2002
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3樓2011-04-22 11:26:49
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4樓2011-04-23 11:49:23
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【答案】應(yīng)助回帖
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咸魚(金幣+5, EPI+1): 很認(rèn)真呀，希望高手繼續(xù)應(yīng)助各位小木蟲 2011-04-23 23:14:41
咸魚(金幣+5, EPI+1): 很認(rèn)真呀，希望高手繼續(xù)應(yīng)助各位小木蟲 2011-04-23 23:14:41
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這回給你簡(jiǎn)單點(diǎn)說(shuō)吧 差速貼壁 原理超簡(jiǎn)單 就是利用不同細(xì)胞的貼壁速度不一樣而達(dá)到將細(xì)胞分離純化的目的 方法也不復(fù)雜的 1.將皿底鋪上粘附液如多聚賴氨酸、明膠等等 2.一段時(shí)間后，等粘附劑充分在皿底形成一層粘附層 一般為37度一個(gè)小時(shí)以上 3.將消化完得混合細(xì)胞均勻接種到皿中 4.培養(yǎng)，期間大約一個(gè)小時(shí)左右成纖維細(xì)胞可以完成貼壁 如果明確知道你的目的細(xì)胞的貼壁時(shí)間的話就繼續(xù)培養(yǎng) 要是不知道在摸索的話就選擇在這個(gè)時(shí)候輕輕晃動(dòng)培養(yǎng)皿吸走沒有完成貼壁的細(xì)胞 5.將完成第一步出去成纖維細(xì)胞的混合細(xì)胞接著鋪在第二個(gè)處理過(guò)的皿中，培養(yǎng) 再等待第二個(gè)陰性細(xì)胞完成貼壁，吸走未貼壁細(xì)胞 6.循環(huán)這個(gè)循環(huán)到純化出來(lái)你想要的細(xì)胞 7.等陽(yáng)性細(xì)胞完成貼壁后，吸走剩下的為貼壁細(xì)胞，完成了整個(gè)純化過(guò)程 PS：要是知道你的細(xì)胞的貼壁速度的話 其實(shí)是可以兩步到位的 1.培養(yǎng)混合細(xì)胞到陽(yáng)性細(xì)胞正準(zhǔn)備貼壁還未貼壁，但其他細(xì)胞完成貼壁的時(shí)間 2.吸走為貼壁細(xì)胞就是你想要的細(xì)胞，在做一下純化就可以的了 PS：此種方法相對(duì)繁瑣，但是對(duì)細(xì)胞無(wú)毒性作用，得到的細(xì)胞狀態(tài)較好 但是純度不是特別好，需進(jìn)一步純化 密度梯度離心 原理：用一定的介質(zhì)在離心管內(nèi)形成一連續(xù)或不連續(xù)的密度梯度，將細(xì)胞混懸液或勻漿置于介質(zhì)的頂部，通過(guò)重力或離心力場(chǎng)的作用使細(xì)胞分層、分離的方法。密度梯度離心常用的介質(zhì)為氯化銫、蔗糖和多聚蔗糖。 現(xiàn)在多用商品化的percoll了。 方法： 1.制作混合細(xì)胞 2.將細(xì)胞緩慢加入percoll中 3.離心 4.取各層細(xì)胞鑒定 5.確定陽(yáng)性細(xì)胞的位置 6.直接收集陽(yáng)性細(xì)胞所在層percoll 7.從percoll中收集細(xì)胞 PS：此種方法快速簡(jiǎn)便 得到的細(xì)胞相對(duì)純度要更高一些 但是percoll有一定的細(xì)胞毒性 注意使用，盡量減少細(xì)胞在percoll中的時(shí)間 |
5樓2011-04-23 12:04:24
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