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石頭影子2002木蟲 (正式寫手)
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[求助]
求助細胞分選純化方法
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| 老板說流式和免疫磁珠分選細胞太貴了，有沒有簡便實惠的方法？培養(yǎng)細胞為貼壁型，有沒有聽過抗體包被，怎么操作呢？有相關(guān)的方法嗎？初學這個，不懂請高手們指教。謝謝 |
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jhu132llh
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4樓2011-04-23 11:49:23
jhu132llh
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2樓2011-04-22 10:07:48
石頭影子2002
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3樓2011-04-22 11:26:49
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【答案】應助回帖
★ ★ ★ ★ ★
咸魚(金幣+5, EPI+1): 很認真呀，希望高手繼續(xù)應助各位小木蟲 2011-04-23 23:14:41
咸魚(金幣+5, EPI+1): 很認真呀，希望高手繼續(xù)應助各位小木蟲 2011-04-23 23:14:41
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這回給你簡單點說吧 差速貼壁 原理超簡單 就是利用不同細胞的貼壁速度不一樣而達到將細胞分離純化的目的 方法也不復雜的 1.將皿底鋪上粘附液如多聚賴氨酸、明膠等等 2.一段時間后，等粘附劑充分在皿底形成一層粘附層 一般為37度一個小時以上 3.將消化完得混合細胞均勻接種到皿中 4.培養(yǎng)，期間大約一個小時左右成纖維細胞可以完成貼壁 如果明確知道你的目的細胞的貼壁時間的話就繼續(xù)培養(yǎng) 要是不知道在摸索的話就選擇在這個時候輕輕晃動培養(yǎng)皿吸走沒有完成貼壁的細胞 5.將完成第一步出去成纖維細胞的混合細胞接著鋪在第二個處理過的皿中，培養(yǎng) 再等待第二個陰性細胞完成貼壁，吸走未貼壁細胞 6.循環(huán)這個循環(huán)到純化出來你想要的細胞 7.等陽性細胞完成貼壁后，吸走剩下的為貼壁細胞，完成了整個純化過程 PS：要是知道你的細胞的貼壁速度的話 其實是可以兩步到位的 1.培養(yǎng)混合細胞到陽性細胞正準備貼壁還未貼壁，但其他細胞完成貼壁的時間 2.吸走為貼壁細胞就是你想要的細胞，在做一下純化就可以的了 PS：此種方法相對繁瑣，但是對細胞無毒性作用，得到的細胞狀態(tài)較好 但是純度不是特別好，需進一步純化 密度梯度離心 原理：用一定的介質(zhì)在離心管內(nèi)形成一連續(xù)或不連續(xù)的密度梯度，將細胞混懸液或勻漿置于介質(zhì)的頂部，通過重力或離心力場的作用使細胞分層、分離的方法。密度梯度離心常用的介質(zhì)為氯化銫、蔗糖和多聚蔗糖。 現(xiàn)在多用商品化的percoll了。 方法： 1.制作混合細胞 2.將細胞緩慢加入percoll中 3.離心 4.取各層細胞鑒定 5.確定陽性細胞的位置 6.直接收集陽性細胞所在層percoll 7.從percoll中收集細胞 PS：此種方法快速簡便 得到的細胞相對純度要更高一些 但是percoll有一定的細胞毒性 注意使用，盡量減少細胞在percoll中的時間 |
5樓2011-04-23 12:04:24
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