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[求助]
求助連接反應中的問題，謝謝!
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大家好，連接反應中遇到了問題，希望大家給予幫助，謝謝！ 最近一直在構建重組質粒載體，載體為PET28a，目的片段大約為500bp。因為我是在重復師長的實驗，師長使用的連接條件是：NEB連接酶，22度，10min。因為我們沒有定NEB連接酶，因此在開始時，我使用的連接條件是Takara T4連接酶，22度，10min。后來發(fā)現(xiàn)連不上，便將條件調節(jié)為16度，3個小時�？墒寝D化涂板后發(fā)現(xiàn)依然沒有單克隆生長。凝膠顯示酶切也正常，回收片段的濃度也測定了，根據載體與目的片段1:10進行連接，可是，就是長不出單克隆。 另外，想請問：加連接體系時時需要是冰浴條件下嗎？是否是在里阿杰反應中有一些該注意的細節(jié)沒有注意呢？ 我實在是找不出自己是哪里出現(xiàn)問題了，希望大家給予幫助。謝謝了！ |
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2樓2011-04-23 22:52:01
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西瓜(金幣+2): 鼓勵應助 2011-04-23 23:30:27
wzc4884(金幣+3): 2011-04-24 14:35:36
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wzc4884(金幣+3): 2011-04-24 14:35:36
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當沒有問題的時候，怎么做都行， 一旦有問題了，就郁悶了 建議你做實驗的時候，把對照做全了，然后才好分析哪一步出了問題 具體請參看，http://www.gaoyang168.com/bbs/viewthread.php?tid=3105782&authorid=426591 |
3樓2011-04-23 23:18:41
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8樓2011-04-24 23:37:00
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