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zhaoxinrui0511金蟲 (小有名氣)
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[求助]
克隆基因和載體連接后轉(zhuǎn)化至大腸桿菌，為什么每次涂板都是空平板沒有菌落？
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小弟快崩潰了，請大家?guī)蛶兔Γ?br />
目的基因經(jīng)PCR擴增后（引物上分別加入：Nco I和Xba I酶切位點）和T載體相連，經(jīng)測序驗證序列唔錯，之后從T載體上用Nco I和Xba I雙酶切重新獲得了目的基因（酶切產(chǎn)物的純化采用寶生物的膠回收），同時將可以在大腸桿菌中復制存在的乳酸菌載體pNZ8148用Nco I和Xba I雙酶切（酶切產(chǎn)物的純化采用寶生物的膠回收），按載體：目的片段（1：4）連接后轉(zhuǎn)化至大腸桿菌，為什么每次涂板都是空平板沒有菌落？（但我直接轉(zhuǎn)化pNZ8148空載體每次都可以張很多菌落）。 小弟著急畢業(yè)，請各位大哥幫幫忙吧。 |
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zhaoxinrui0511
金蟲 (小有名氣)
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5樓2011-04-24 20:14:26
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