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[求助]
咨詢個(gè)基因重組實(shí)驗(yàn)中問題
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各位高手們， 咨詢大家個(gè)問題，基因重組實(shí)驗(yàn)中有一步是給切好的質(zhì)粒載體用堿性磷酸酶去磷酸化，之后再用連接酶連接目的基因片段和質(zhì)粒載體。請問，這步中如果把去磷酸化的質(zhì)粒載體再用連接酶連接，是否可以在連接上？如果不可以，那為什么能把質(zhì)粒載體和目的基因片段連接上？ [ Last edited by yuliansheng on 2011-4-27 at 12:46 ] |
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eileen8519
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5樓2011-10-13 12:02:49
xuguanghai
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【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★
yuliansheng(金幣+1): 說的太好、太詳細(xì)了，謝謝，真的很感謝！ 2011-04-27 20:48:46
西瓜(金幣+3): Good!可惜不是原創(chuàng)，離EPI差一點(diǎn)。 2011-04-27 21:35:45
yuliansheng(金幣+1): 說的太好、太詳細(xì)了，謝謝，真的很感謝！ 2011-04-27 20:48:46
西瓜(金幣+3): Good!可惜不是原創(chuàng)，離EPI差一點(diǎn)。 2011-04-27 21:35:45
| 常常使用堿性磷酸酶去除5’磷酸基團(tuán)以抑制載體DNA的自身環(huán)化。利用T4 DNA連接酶進(jìn)行目的DNA片段和載體的體外連接反應(yīng)，也就是在雙鏈DNA 5’磷酸和相鄰的3’羥基之間形成新的共價(jià)鍵。如載體的兩條鏈都帶有5’磷酸（未脫磷），可形成4個(gè)新的磷酸二酯鍵；如載體DNA已脫磷，則只能形成2個(gè)新的磷酸二酯鍵，此時(shí)產(chǎn)生的重組DNA帶有兩個(gè)單鏈缺口，在導(dǎo)入感受態(tài)細(xì)胞后可被修復(fù)。 |
2樓2011-04-27 13:51:25
3樓2011-04-27 20:50:54
4樓2011-05-19 09:15:09
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