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zaasyangyong

金蟲 (正式寫手)

[交流] 一個關于水稻基因圖位克隆的問題誠摯懇求大牛解答

一個關于水稻基因圖位克隆的問題誠摯懇求大牛解答

我在做一個類病變突變體的基因圖位克隆。

首先，突變體和它的野生型雜交確定顯隱性，F(xiàn)2分離群體內 突變型：野生型=1：3，卡方檢測差異不顯著，說明單基因隱性；

接著，用突變體和秈稻9311雜交，選F2有限群體進行粗定位，結果問題來了。選了突變型50個單株，無突變表型28個單株。全基因組篩到一個標記，在50個突變群體內，突變體的帶型：9311的帶型：雜合帶型=40：1：9。感覺應該和這個標記有連鎖。然而，在28個無突變表型群體內，突變體的帶型：9311的帶型：雜合帶型=11：6：11。開始懷疑是不是單株取錯了，又取了一批葉片，結果還是突變體的帶型很多，和突變群體內的比例完全不是一個類型的趨勢。

真是百思不得其解，懇求大牛解答，到底是腫么回事�。�
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zaasyangyong

金蟲 (正式寫手)
1949stone: 過節(jié)去了 2011-10-04 22:33:24
怎么沒人說話啊？
2樓2011-10-04 22:05:29
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zaasyangyong

金蟲 (正式寫手)
怎么沒人來說說�。�
3樓2011-10-05 21:49:33
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wanhscn

木蟲 (職業(yè)作家)
什么突變自然突變還是EMS等誘導的單位點突變?
4樓2011-10-05 21:56:20
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wanhscn

木蟲 (職業(yè)作家)
★ ★
西瓜(金幣+2): 鼓勵應助 2011-10-05 22:37:14
zaasyangyong(金幣+3): 謝謝回復賜教 2011-10-06 15:58:37
40+11=51個突變帶型, 其中沒有突變表性的11銖,交換11/51=20%, 遺傳距離20CM,沒有連鎖!
5樓2011-10-05 22:19:07
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wanhscn

木蟲 (職業(yè)作家)
★
西瓜(金幣+1): good 2011-10-05 22:42:59
應該用抗感池法進行篩標記
6樓2011-10-05 22:20:02
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zaasyangyong

金蟲 (正式寫手)
引用回帖:
4樓: Originally posted by wanhscn at 2011-10-05 21:56:20:
什么突變自然突變還是EMS等誘導的單位點突變?

鈷輻射突變
7樓2011-10-06 15:31:43
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zaasyangyong

金蟲 (正式寫手)
★ ★ ★
wanhscn(金幣+3): 鼓勵交流！ 2011-10-10 09:57:37
引用回帖:
5樓: Originally posted by wanhscn at 2011-10-05 22:19:07:
40+11=51個突變帶型, 其中沒有突變表性的11銖,交換11/51=20%, 遺傳距離20CM,沒有連鎖!

但是如果只看突變表型的群體，50個有40個是突變體的帶型，應該有連鎖啊，只是可能標記與目的基因遠些，有些交換株；納悶的就是野生型表型的群體，開始懷疑是取錯了葉片了，比如說有些類病變幼苗時期沒表型，成株期才有；但是又取了一批，還是如此，就是說兩個池遺傳動向不一樣，但是突變體和它的野生型雜交就很好的1：3分離，而秈粳雜交就不對了。
8樓2011-10-06 15:41:37
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zaasyangyong

金蟲 (正式寫手)
★ ★
wanhscn(金幣+2): 鼓勵把你篩的認為與基因有連鎖的Marker的PAGE圖片發(fā)上來看看，抗感池以及親本的！ 2011-10-10 10:00:07
引用回帖:
6樓: Originally posted by wanhscn at 2011-10-05 22:20:02:
應該用抗感池法進行篩標記

一開始也是用兩個混池去篩選的，就篩到了這個標記，突變表型的池帶型同突變體，無突變表型的池的帶型是雜合的。然后進一步才把兩個池都展開的，就發(fā)現(xiàn)不對了。
9樓2011-10-06 15:46:42
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zaasyangyong

金蟲 (正式寫手)
引用回帖:
9樓: Originally posted by zaasyangyong at 2011-10-06 15:46:42:
一開始也是用兩個混池去篩選的，就篩到了這個標記，突變表型的池帶型同突變體，無突變表型的池的帶型是雜合的。然后進一步才把兩個池都展開的，就發(fā)現(xiàn)不對了。

兩個混池說的含糊，是指突變表型的群體混成一個池，無突變表型的群體混成一個池。
10樓2011-10-06 15:57:18
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zaasyangyong

金蟲 (正式寫手)
大家多多說說腫么回事啊？這么看來，如果篩選的點是對的，在F2群體里有些攜帶突變基因的單株不表現(xiàn)表型，還是其它怎么地？還是這個點就是錯的？到底要繼續(xù)這個點精細，還是要再重新粗篩？

可是已經全基因組篩選了，平均每條染色體20個多態(tài)標記。
11樓2011-10-06 16:05:28
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zaasyangyong

金蟲 (正式寫手)
怎么不讓追加懸賞了��？怎么才能繼續(xù)追加？

有誰賜教，再付6個金幣，怎么付法？

[ Last edited by zaasyangyong on 2011-10-6 at 21:08 ]
12樓2011-10-06 16:10:24
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zaasyangyong

金蟲 (正式寫手)
引用回帖:
12樓: Originally posted by zaasyangyong at 2011-10-06 16:10:24:
怎么不讓追加懸賞了��？怎么才能繼續(xù)追加？

有誰賜教，再付6個金幣，怎么付法？
[ Last edited by zaasyangyong on 2011-10-6 at 21:08 ]

版主已經改為交流貼，可以加金幣了，再付10個金幣。
13樓2011-10-06 21:08:48
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zaasyangyong

金蟲 (正式寫手)
怎么沒人說話了�。�
14樓2011-10-09 14:50:24
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★
小木蟲(金幣+0.5):給個紅包，謝謝回帖
zaasyangyong(金幣+5): 謝謝 2011-10-10 20:14:56
這塊不懂哦……要不要給你移到綜合版或者動植物版？
15樓2011-10-09 22:23:31
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zaasyangyong

金蟲 (正式寫手)
引用回帖:
15樓: Originally posted by 西瓜 at 2011-10-09 22:23:31:
這塊不懂哦……要不要給你移到綜合版或者動植物版？

謝謝，不用了，那里我也發(fā)了，還不這里應者多。
16樓2011-10-10 09:30:12
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wanhscn

木蟲 (職業(yè)作家)
★
小木蟲(金幣+0.5):給個紅包，謝謝回帖
抗感池幾個單株混的？5個？

[ Last edited by wanhscn on 2011-10-10 at 10:04 ]
17樓2011-10-10 09:43:05
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wanhscn

木蟲 (職業(yè)作家)
★
小木蟲(金幣+0.5):給個紅包，謝謝回帖
zaasyangyong(金幣+2): 謝謝 2011-10-10 11:21:21
zaasyangyong(金幣+5): 謝謝賜教 2011-10-10 11:21:52
mengfei8336(MolEPI+1): Thank you. 2011-10-10 14:55:09
9331以及雜合帶型為27株，其中有突變表型的是10株，10/27=40%的交換率，感覺還是有點大，有沒有再近一點的標記？
18樓2011-10-10 09:47:42
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wanhscn

木蟲 (職業(yè)作家)
★ ★
小木蟲(金幣+0.5):給個紅包，謝謝回帖
西瓜(金幣+1): 熱心斑斑啊 2011-10-10 18:17:58
引用回帖:
8樓: Originally posted by zaasyangyong at 2011-10-06 15:41:37:
但是如果只看突變表型的群體，50個有40個是突變體的帶型，應該有連鎖啊，只是可能標記與目的基因遠些，有些交換株；納悶的就是野生型表型的群體，開始懷疑是取錯了葉片了，比如說有些類病變幼苗時期沒表型，成株 ...

類病變多為防衛(wèi)或者抗病基因出了問題，即使在沒有病接種的情況下，也表現(xiàn)為感病癥狀。至于成熟期幼苗時期這個是怎么回事？會不會是成熟期是真感病了？（我不太清楚，做小麥的）
19樓2011-10-10 09:51:53
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wanhscn

木蟲 (職業(yè)作家)
引用回帖:
1樓: Originally posted by zaasyangyong at 2011-10-04 21:16:19:
一個關于水稻基因圖位克隆的問題誠摯懇求大牛解答

我在做一個類病變突變體的基因圖位克隆。

首先，突變體和它的野生型雜交確定顯隱性，F(xiàn)2分離群體內 突變型：野生型=1：3，卡方檢測差異不顯著，說明單基因 ...

雜合型的植株的表型與野生純合型的表型是完全一致嗎？存在不存在劑量效應？
20樓2011-10-10 09:55:23
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wanhscn

木蟲 (職業(yè)作家)
★
小木蟲(金幣+0.5):給個紅包，謝謝回帖
引用回帖:
11樓: Originally posted by zaasyangyong at 2011-10-06 16:05:28:
大家多多說說腫么回事��？這么看來，如果篩選的點是對的，在F2群體里有些攜帶突變基因的單株不表現(xiàn)表型，還是其它怎么地？還是這個點就是錯的？到底要繼續(xù)這個點精細，還是要再重新粗篩？

可是已經全基因組篩選 ...

你篩的這個標記（認為與基因有連鎖的）與你曬過的與它最近的標記能連在同一連鎖群嗎？兩個親本的不同帶型在同一遺傳位置嗎？PAGE圖上來看看！
21樓2011-10-10 10:03:42
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zaasyangyong

金蟲 (正式寫手)
引用回帖:
17樓: Originally posted by wanhscn at 2011-10-10 09:43:05:
抗感池幾個單株混的？5個？
[ Last edited by wanhscn on 2011-10-10 at 10:04 ]

抗池50，感池28.
22樓2011-10-10 10:21:25
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wanhscn

木蟲 (職業(yè)作家)
★
小木蟲(金幣+0.5):給個紅包，謝謝回帖
引用回帖:
22樓: Originally posted by zaasyangyong at 2011-10-10 10:21:25:
抗池50，感池28.

哦！我們做小麥，全基因組粗篩一般最多10個單株混池！
23樓2011-10-10 10:24:57
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zaasyangyong

金蟲 (正式寫手)
引用回帖:
18樓: Originally posted by wanhscn at 2011-10-10 09:47:42:
9331以及雜合帶型為27株，其中有突變表型的是10株，10/27=40%的交換率，感覺還是有點大，有沒有再近一點的標記？

如果考慮無突變表型群體，算起來就都是有疑問。最初是整條染色體平均選標記粗篩。你說的新標記我也這么想，我正在附近加密標記，找其它標記看看什么情況。
24樓2011-10-10 10:31:31
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zaasyangyong

金蟲 (正式寫手)
引用回帖:
19樓: Originally posted by wanhscn at 2011-10-10 09:51:53:
類病變多為防衛(wèi)或者抗病基因出了問題，即使在沒有病接種的情況下，也表現(xiàn)為感病癥狀。至于成熟期幼苗時期這個是怎么回事？會不會是成熟期是真感病了？（我不太清楚，做小麥的）

我的意思是，我的類病變突變體目的基因在幼苗期不表現(xiàn)表型，結果我選的無表型群體里混進了突變體表型的單株。
25樓2011-10-10 10:35:43
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zaasyangyong

金蟲 (正式寫手)
引用回帖:
20樓: Originally posted by wanhscn at 2011-10-10 09:55:23:
雜合型的植株的表型與野生純合型的表型是完全一致嗎？存在不存在劑量效應？

這是個好問題，可能是問題的關鍵。感覺可能有些復雜，雜合型與野生型表型還真不太一樣，有些半顯性，即，表型程度：純合突變型>雜合>純合野生型。
26樓2011-10-10 10:41:45
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zaasyangyong

金蟲 (正式寫手)
★ ★
wanhscn(金幣+2): 恩,是的!HZ那邊搞水稻很厲害的,有CNRRI以及ZAAS 2011-10-10 12:11:13
引用回帖:
21樓: Originally posted by wanhscn at 2011-10-10 10:03:42:
你篩的這個標記（認為與基因有連鎖的）與你曬過的與它最近的標記能連在同一連鎖群嗎？兩個親本的不同帶型在同一遺傳位置嗎？PAGE圖上來看看！

應該在同一連鎖群及同一位置，不過群體不大，沒有算過。但是對于水稻來說，這些標記都已經很清楚了，水稻的基因組序列也已測過，這些標記的物理距離也已明確，都是在第2號染色體上中間的。而且我們同一個親本來的其它突變體，多態(tài)標記都是統(tǒng)一篩過明晰的，都定了好多基因了。
27樓2011-10-10 10:48:52
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zaasyangyong

金蟲 (正式寫手)
★ ★ ★
wanhscn(金幣+2): 這個標記很不錯,應該沒有問題! 2011-10-10 11:54:41
西瓜(金幣+1): 鼓勵上圖 2011-10-10 18:18:24
引用回帖:
21樓: Originally posted by wanhscn at 2011-10-10 10:03:42:
你篩的這個標記（認為與基因有連鎖的）與你曬過的與它最近的標記能連在同一連鎖群嗎？兩個親本的不同帶型在同一遺傳位置嗎？PAGE圖上來看看！

PAGE圖

PAGE圖
28樓2011-10-10 11:08:26
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zaasyangyong

金蟲 (正式寫手)
引用回帖:
23樓: Originally posted by wanhscn at 2011-10-10 10:24:57:
哦！我們做小麥，全基因組粗篩一般最多10個單株混池！

我們早期其它突變體，混池的單株也選得較少。但是發(fā)現(xiàn)這樣遠一點的標記，混池里重組的單株會多一些，這樣遠一點的標記很難發(fā)現(xiàn)，這樣粗篩時的標記就要求比較密。其實各有優(yōu)缺點。
29樓2011-10-10 11:19:59
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zaasyangyong

金蟲 (正式寫手)
wanhscn: 沒關系,重在交流~ 2011-10-10 11:52:45
怎么不能給評分了？？不能連續(xù)評分3個回復以上嗎？

[ Last edited by zaasyangyong on 2011-10-10 at 11:32 ]
30樓2011-10-10 11:30:35
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wanhscn

木蟲 (職業(yè)作家)
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
小木蟲(金幣+0.5):給個紅包，謝謝回帖
西瓜(金幣+6): 代樓主獎勵 2011-10-10 18:29:43
引用回帖:
25樓: Originally posted by zaasyangyong at 2011-10-10 10:35:43:
我的意思是，我的類病變突變體目的基因在幼苗期不表現(xiàn)表型，結果我選的無表型群體里混進了突變體表型的單株。

那些被認為是混進了的突變體表性的單株,會不會是雜合帶型?就目前沒有更近的標記的情況下,我的個人推測!

[ Last edited by wanhscn on 2011-10-10 at 12:25 ]
31樓2011-10-10 12:02:15
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wanhscn

木蟲 (職業(yè)作家)
★
小木蟲(金幣+0.5):給個紅包，謝謝回帖
引用回帖:
26樓: Originally posted by zaasyangyong at 2011-10-10 10:41:45:
這是個好問題，可能是問題的關鍵。感覺可能有些復雜，雜合型與野生型表型還真不太一樣，有些半顯性，即，表型程度：純合突變型>雜合>純合野生型。

如果這樣的話,您看是不是要把中間表型的也區(qū)分開?
32樓2011-10-10 12:04:32
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zaasyangyong

金蟲 (正式寫手)
★ ★ ★ ★ ★ ★
西瓜(金幣-6): 每個帖子里最多只能給同一個人10金幣。那我代扣吧。 2011-10-10 18:19:26
斑斑，怎么不能評分了？把增加的6分給wanhscn 吧，就討論到這吧，我繼續(xù)做看看什么情況。
33樓2011-10-10 14:21:23
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qiusuo

鐵桿木蟲 (著名寫手)
★
小木蟲(金幣+0.5):給個紅包，謝謝回帖
個人感覺取樣有問題，可能成熟期取樣較好，另外增加標記，加大群體。
34樓2012-01-10 20:04:33
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kidluag

金蟲 (正式寫手)
★
小木蟲: 金幣+0.5, 給個紅包，謝謝回帖
所謂的池是隨機的池，所篩的池內同時含有突變的和不突變的，不知道我理解的是否對，您是用TILLING建池的么？
35樓2012-06-07 02:21:49
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qiusuo

鐵桿木蟲 (著名寫手)
★
小木蟲: 金幣+0.5, 給個紅包，謝謝回帖
附近的標記再上幾個，群體再擴大一點。
36樓2012-11-20 20:13:17
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