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zhaoqingcaas新蟲(chóng) (小有名氣)
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[求助]
SDS-PAGE電泳中，蛋白質(zhì)分子（多肽分子）是伸展?fàn)顟B(tài)的嗎？
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我的融合蛋白由兩個(gè)相同大小（27kDa）的蛋白線性連接而成，在跑電泳時(shí)會(huì)出現(xiàn)兩條帶，一條是融合蛋白，大小55kDa，另一條是裂解后的帶，大小27kDa 做轉(zhuǎn)印時(shí)，只有裂解后的小蛋白可以與各自的血清反應(yīng)，融合蛋白不被兩種血清所識(shí)別。 請(qǐng)問(wèn)： 1 融合蛋白為什么會(huì)裂解，為什么只在連接處裂解，而不在其他任何部位裂解呢？ 2在變性條件下，融合的大蛋白與裂解了的蛋白只有分子量大小的差異，其他條件都是一樣的，都是包涵體蛋白，高溫變性后次級(jí)鍵被破壞，成為無(wú)序松散的伸展?fàn)顟B(tài)，如果小蛋白能夠有線性表位可以被陽(yáng)性血清所識(shí)別，為什么大蛋白的線性表位不能被血清所識(shí)別呢？蛋白質(zhì)在變性條件以及電極作用下都是伸展?fàn)顟B(tài)，有沒(méi)有可能融合蛋白由于分子量大，并沒(méi)有完全伸展，出現(xiàn)隨機(jī)的折疊狀態(tài)，導(dǎo)致抗原表位沒(méi)有完全暴露，所以不被血清識(shí)別？ |
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【答案】應(yīng)助回帖
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lstt09nk(金幣+3): 鼓勵(lì)下~~看來(lái)樓主是個(gè)動(dòng)漫控，頭像柯南，昵稱大空翼~~~ 2011-05-03 23:01:15
zhaoqingcaas(金幣+20): 這兩個(gè)小片段只是大小一樣，linker是一個(gè)小的具有酶活性的蛋白，可以自我催化下游蛋白解離，所以會(huì)裂解。這個(gè)不是我構(gòu)建的，我也剛剛問(wèn)明白，呵呵，非常感謝你的回答。小蛋白被識(shí)別是因?yàn)樵谵D(zhuǎn)印到膜上以后，變性條件去除，部分空間構(gòu)象恢復(fù)。而融合蛋白因?yàn)橐患?jí)結(jié)構(gòu)改變而無(wú)法形成正確的高級(jí)結(jié)構(gòu)，所以不被血清所識(shí)別。我也是剛剛弄明白，不過(guò)還是非常感謝你的回答，歡迎討論 2011-05-03 23:35:02
lstt09nk(金幣+3): 鼓勵(lì)下~~看來(lái)樓主是個(gè)動(dòng)漫控，頭像柯南，昵稱大空翼~~~ 2011-05-03 23:01:15
zhaoqingcaas(金幣+20): 這兩個(gè)小片段只是大小一樣，linker是一個(gè)小的具有酶活性的蛋白，可以自我催化下游蛋白解離，所以會(huì)裂解。這個(gè)不是我構(gòu)建的，我也剛剛問(wèn)明白，呵呵，非常感謝你的回答。小蛋白被識(shí)別是因?yàn)樵谵D(zhuǎn)印到膜上以后，變性條件去除，部分空間構(gòu)象恢復(fù)。而融合蛋白因?yàn)橐患?jí)結(jié)構(gòu)改變而無(wú)法形成正確的高級(jí)結(jié)構(gòu)，所以不被血清所識(shí)別。我也是剛剛弄明白，不過(guò)還是非常感謝你的回答，歡迎討論 2011-05-03 23:35:02
| 你的血清是怎么得來(lái)的，是用線性蛋白（變性蛋白）打兔子的來(lái)的嗎。建議可以先用考染看看，到底是你的蛋白是都是27的還是還有55的。在確定是不是血清問(wèn)題。還有請(qǐng)問(wèn)這兩個(gè)小片段是完全一樣的還是只是大小一樣， |
2樓2011-05-03 21:52:02
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