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zhaoqingcaas新蟲 (小有名氣)
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[求助]
SDS-PAGE電泳中，蛋白質分子（多肽分子）是伸展狀態(tài)的嗎？
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我的融合蛋白由兩個相同大小（27kDa）的蛋白線性連接而成，在跑電泳時會出現(xiàn)兩條帶，一條是融合蛋白，大小55kDa，另一條是裂解后的帶，大小27kDa 做轉印時，只有裂解后的小蛋白可以與各自的血清反應，融合蛋白不被兩種血清所識別。 請問： 1 融合蛋白為什么會裂解，為什么只在連接處裂解，而不在其他任何部位裂解呢？ 2在變性條件下，融合的大蛋白與裂解了的蛋白只有分子量大小的差異，其他條件都是一樣的，都是包涵體蛋白，高溫變性后次級鍵被破壞，成為無序松散的伸展狀態(tài)，如果小蛋白能夠有線性表位可以被陽性血清所識別，為什么大蛋白的線性表位不能被血清所識別呢？蛋白質在變性條件以及電極作用下都是伸展狀態(tài)，有沒有可能融合蛋白由于分子量大，并沒有完全伸展，出現(xiàn)隨機的折疊狀態(tài)，導致抗原表位沒有完全暴露，所以不被血清識別？ |
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天涯蕭客
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【答案】應助回帖
★ ★ ★
lstt09nk(金幣+3): 鼓勵下~~看來樓主是個動漫控，頭像柯南，昵稱大空翼~~~ 2011-05-03 23:01:15
zhaoqingcaas(金幣+20): 這兩個小片段只是大小一樣，linker是一個小的具有酶活性的蛋白，可以自我催化下游蛋白解離，所以會裂解。這個不是我構建的，我也剛剛問明白，呵呵，非常感謝你的回答。小蛋白被識別是因為在轉印到膜上以后，變性條件去除，部分空間構象恢復。而融合蛋白因為一級結構改變而無法形成正確的高級結構，所以不被血清所識別。我也是剛剛弄明白，不過還是非常感謝你的回答，歡迎討論 2011-05-03 23:35:02
lstt09nk(金幣+3): 鼓勵下~~看來樓主是個動漫控，頭像柯南，昵稱大空翼~~~ 2011-05-03 23:01:15
zhaoqingcaas(金幣+20): 這兩個小片段只是大小一樣，linker是一個小的具有酶活性的蛋白，可以自我催化下游蛋白解離，所以會裂解。這個不是我構建的，我也剛剛問明白，呵呵，非常感謝你的回答。小蛋白被識別是因為在轉印到膜上以后，變性條件去除，部分空間構象恢復。而融合蛋白因為一級結構改變而無法形成正確的高級結構，所以不被血清所識別。我也是剛剛弄明白，不過還是非常感謝你的回答，歡迎討論 2011-05-03 23:35:02
| 你的血清是怎么得來的，是用線性蛋白（變性蛋白）打兔子的來的嗎。建議可以先用考染看看，到底是你的蛋白是都是27的還是還有55的。在確定是不是血清問題。還有請問這兩個小片段是完全一樣的還是只是大小一樣， |
2樓2011-05-03 21:52:02
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