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yujijiang銅蟲 (初入文壇)
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[求助]
DGGE上樣孔很亮，DNA跑不下來
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最近在做氨氧化細(xì)菌的生物多樣性，我擴(kuò)增了amoA的基因特異性很好，條帶單一，但是做DGGE時(shí)好多跑不出孔，已經(jīng)嘗試了很多次，情況依舊。請各位大蝦給小弟指點(diǎn)迷津。。。萬分感謝！ DGGE的條件：6%的膠，變性梯度是30-60%，沒有堆積膠，上樣前PCR產(chǎn)物為純化，上樣前會將孔沖洗一下，電泳時(shí)間90V，13h。 我灌膠是做的0%和100%的母液，灌膠時(shí)高低濃度為14毫升，加入100微升APS和9微升的TEMED。 |
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yujijiang
銅蟲 (初入文壇)
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4樓2011-05-05 13:34:01
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★
lstt09nk(金幣+3): 感謝交流，歡迎常來 2011-05-05 18:22:07
lstt09nk(金幣+3): 感謝交流，歡迎常來 2011-05-05 18:22:07
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我做過Archaea 的amoA基因的DGGE，效果很好。 細(xì)菌的amoA基因的DGGE沒做過。呵呵。 Archaeal amoA genes were amplified using primers CrenamoA-23f and CrenamoA-616r without the requirement of a GC clamp. Archaeal amoA gene DGGE protocol: 0.75-mm-thick 8% (w/v) polyacrylamide gels, 15% to 60%,Gels were electrophoresed in 1 × TAE buffer at 60 °C for 14 h at 90 V. 樓主可以將你的引物序列，名稱，PCR程序貼出來看看 |
2樓2011-05-05 12:26:30
3樓2011-05-05 13:00:00
yujijiang
銅蟲 (初入文壇)
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5樓2011-05-05 13:35:14
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