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2009227004金蟲 (正式寫手)
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[求助]
關(guān)于蛋白重組表達(dá)的問題
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最近在做一蛋白的表達(dá)，利用已有的質(zhì)粒已經(jīng)表達(dá)出來了帶GST標(biāo)簽的蛋白，現(xiàn)在碰到了一些問題： 1、在過谷胱甘肽親和層析柱（GS4B）分離表達(dá)蛋白時(shí)，采用了還原型谷胱甘肽（GSH）進(jìn)行洗脫，然后經(jīng)凝血酶酶切，再過谷胱甘肽親和層析柱（GS4B）時(shí)，如何去掉樣品里面的還原型谷胱甘肽（GSH）。 2、凝血酶的用量應(yīng)如何計(jì)算，購買于sigma公司，其使用說明說也沒有具體說明。  |
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lxj341401
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2樓2011-05-08 15:09:51
lxj341401
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3樓2011-05-08 22:30:26
2009227004
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就是不用透析，把含有GSH的樣品拿去濃縮，濃到一定體積，再加入buffer再進(jìn)行濃縮，重復(fù)幾次，這樣的效果會(huì)不會(huì)比透析差，因?yàn)槲蚁雽?shí)驗(yàn)連接的快一點(diǎn)，透析時(shí)間太久了！ 單位定義是：Unit Definition: Activity is expressed in NIH units obtained by direct comparison to a NIH Thrombin Reference Standard, Lot K. The NIH assay procedure uses 0.2 ml of diluted plasma (1:1 with saline) as a substrate and 0.1 ml of albumin solution based on a modification of the method of Biggs.18 Only clotting times in the range of 15–25 seconds are used for determining thrombin activity. Optimal clotting temperature is 37 °C. |
4樓2011-05-09 10:38:12
lxj341401
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5樓2011-05-09 10:47:59
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6樓2011-05-09 11:04:06
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7樓2011-05-09 13:17:00
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