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2009227004金蟲 (正式寫手)
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[求助]
關于蛋白重組表達的問題
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最近在做一蛋白的表達,利用已有的質(zhì)粒已經(jīng)表達出來了帶GST標簽的蛋白,現(xiàn)在碰到了一些問題: 1、在過谷胱甘肽親和層析柱(GS4B)分離表達蛋白時,采用了還原型谷胱甘肽(GSH)進行洗脫,然后經(jīng)凝血酶酶切,再過谷胱甘肽親和層析柱(GS4B)時,如何去掉樣品里面的還原型谷胱甘肽(GSH)。 2、凝血酶的用量應如何計算,購買于sigma公司,其使用說明說也沒有具體說明。 |
【分子生物】EPI帖 |

至尊木蟲 (著名寫手)
至尊木蟲 (著名寫手)
至尊木蟲 (著名寫手)
金蟲 (正式寫手)
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就是不用透析,把含有GSH的樣品拿去濃縮,濃到一定體積,再加入buffer再進行濃縮,重復幾次,這樣的效果會不會比透析差,因為我想實驗連接的快一點,透析時間太久了! 單位定義是:Unit Definition: Activity is expressed in NIH units obtained by direct comparison to a NIH Thrombin Reference Standard, Lot K. The NIH assay procedure uses 0.2 ml of diluted plasma (1:1 with saline) as a substrate and 0.1 ml of albumin solution based on a modification of the method of Biggs.18 Only clotting times in the range of 15–25 seconds are used for determining thrombin activity. Optimal clotting temperature is 37 °C. |

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