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[交流]
蛋白濃縮過程中發(fā)生沉淀 已有1人參與
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蛋白在用PEG6000包埋濃縮過程中透析袋沒擠緊，蛋白溶液流出了，PEG溶液是否可能進(jìn)入透析袋？而且蛋白發(fā)生沉淀了，但不是絮狀的沉淀，是那種很細(xì)的跟面粉似的沉淀，想請(qǐng)教下濃縮過程中為什么發(fā)生沉淀？ 我的這種沉淀發(fā)生變性了嗎？ 怎樣鑒別蛋白是否變性？ 多謝蟲友們！ |
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3樓2011-05-09 19:46:17
冼亮淀粉酶
專家顧問 (知名作家)
生物大分子降解酶
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- 專業(yè): 環(huán)境微生物學(xué)
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小木蟲(金幣+0.5):給個(gè)紅包，謝謝回帖
rainwander(金幣+5, EPI+1): 直接、必須EPI 2011-05-09 19:04:55
rainwander(EPI+1): 再追加1個(gè)，呵呵 2011-05-09 19:05:14
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rainwander(EPI+1): 再追加1個(gè)，呵呵 2011-05-09 19:05:14
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1、前幾天跟你在短信里說了，你的透析袋是8千的，PEG分子量約為6千，是肯定你能夠進(jìn)入透析袋里的，建議起碼用PEG2萬來濃縮，但是也不保證絕對(duì)不能進(jìn)入，因?yàn)橥肝龃目讖揭膊灰欢ń^對(duì)均一，總有些差異的，遇到大一點(diǎn)的孔徑就能進(jìn)去了。 2、透析袋破了，就更不用說了，肯定有進(jìn)去了的。不是說袋子里的東西是處于流出狀態(tài)的，PEG就不能進(jìn)去，不是絕對(duì)的。下次買透析袋用的夾子，用新處理的透析袋，就沒那么容易破了。 3、濃縮過程中有東西沉淀很正常，因?yàn)榭赡苁悄撤N溶質(zhì)超過溶解度了，可能是鹽類，也可能是蛋白質(zhì)，這跟沉淀的性狀沒關(guān)系，特別是我看你有一張?zhí)永�，有人建議你在4度濃縮，低溫下溶解度大多會(huì)下降，所以沉淀很正常。當(dāng)然，也可能是蛋白質(zhì)的沉淀，因?yàn)镻EG被用來沉淀蛋白質(zhì)，可能你樣品中有的蛋白質(zhì)很容易被PEG沉淀下來，而PEG又通過透析袋的大孔徑進(jìn)入到樣品中。我曾經(jīng)試過PEG沉淀蛋白質(zhì)，但是我所要的蛋白質(zhì)對(duì)PEG不感冒，不沉淀，甚至使用2萬，35%的含量都不沉淀，但是有的文章用的PEG聚合度和濃度都很低就能沉淀了，說不定你遇到的就是這個(gè)情況。 4、至于蛋白質(zhì)有沒有變性，很不好說，即使是沉淀了也不一定就會(huì)變性的。至于怎么鑒別有沒有變性，這也不好說，得看你的蛋白質(zhì)怎么檢驗(yàn)，我們都不知道你的蛋白質(zhì)是哪種。 有空就去找找這幾篇，就明白了。 PEG6000沉淀結(jié)合差速離心方法濃縮水中脊髓灰質(zhì)炎病毒 蛋白質(zhì)沉淀劑對(duì)棉鈴蟲谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶的部分純化 聚乙二醇8000對(duì)棉鈴蟲微粒體蛋白沉淀作用的研究 影響聚乙二醇沉淀試驗(yàn)實(shí)驗(yàn)因素的探討 [ Last edited by 冼亮淀粉酶 on 2011-5-9 at 18:56 ] |
2樓2011-05-09 18:51:06
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