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小木蟲論壇-學術科研互動平臺 » 生物醫(yī)藥區(qū) » 微生物 » 綜合其他 » 自殺質粒
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自殺質粒
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一般用于基因突變。 將突變的目的基因克隆到自殺性質粒載體上，通過接合等使其進入宿主，由于在宿主菌中不存在復制基因啟始所需的復制蛋白（如Pi蛋白等），其無法復制，在外界選擇性壓力的作用下,自殺性質粒載體所攜帶的突變基因就與宿主染色體上的野生型發(fā)生基因發(fā)生二次同源重組，產生了帶有突變的突變株； 而質粒載體自身由于自殺性特性連同染色體上原有的野生型基因一起隨著細菌的傳代從菌體內消失。 至于一次重組的突變株，可借助質粒上的某些選擇基因（如sacB，sucrose敏感）篩除。 這是“自殺質粒”的一些原理性的問題，根據以上我想到了，在用自殺質粒實現突變的過程中，會有以下幾種中間產物的形成： 野生型毒株（需要突變的原始染色體） 一次同源重組的突變株 二次同源重組的突變株 質粒載體本身（隨著自殺質粒本身的特性，而在宿主菌中消失） 同源重組后含有野生型基因組的重組質粒（也隨著自殺質粒的特性，在宿主菌中消失） 我的問題是，野生型的毒株是如何消失的？第一次同源重組與第二次同源重組的原理是什么？ 謝謝 |
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2樓2011-05-16 14:35:15
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天使托
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小木蟲(金幣+0.5):給個紅包，謝謝回帖
wolfebst(金幣+3, EPI+1): 獎勵一下 2011-05-18 15:34:50
小木蟲(金幣+0.5):給個紅包，謝謝回帖
wolfebst(金幣+3, EPI+1): 獎勵一下 2011-05-18 15:34:50
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野生型的毒株是如何消失的？ 答：這個要看你基因敲除是給基因中間插入的是什么片段了，如果是一段帶有抗生素的片段，那么在篩選突變體的過程中我可以加入大量的該抗生素，導致野生型菌株死去，而帶有抗生素片段的敲除基因（已經重組至染色體上）則會生存。 第一次同源重組與第二次同源重組的原理是什么？ 一次重組就是帶有敲除基因的片段和正常基因的片段都在染色體上；而二次重組完全就是將目的基因敲除后整合至染色體上了，如果一般達到一次重組了，繼續(xù)在抗生素的板子上篩選和進行PCR驗證就可以最終得到突變體了！ |
7樓2011-05-18 15:27:30
8樓2012-01-13 14:35:49
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