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biofind

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[交流] 自殺質(zhì)粒

一般用于基因突變。
將突變的目的基因克隆到自殺性質(zhì)粒載體上，通過接合等使其進(jìn)入宿主，由于在宿主菌中不存在復(fù)制基因啟始所需的復(fù)制蛋白（如Pi蛋白等），其無(wú)法復(fù)制，在外界選擇性壓力的作用下,自殺性質(zhì)粒載體所攜帶的突變基因就與宿主染色體上的野生型發(fā)生基因發(fā)生二次同源重組，產(chǎn)生了帶有突變的突變株；
而質(zhì)粒載體自身由于自殺性特性連同染色體上原有的野生型基因一起隨著細(xì)菌的傳代從菌體內(nèi)消失。
至于一次重組的突變株，可借助質(zhì)粒上的某些選擇基因（如sacB，sucrose敏感）篩除。

這是“自殺質(zhì)粒”的一些原理性的問題，根據(jù)以上我想到了，在用自殺質(zhì)粒實(shí)現(xiàn)突變的過程中，會(huì)有以下幾種中間產(chǎn)物的形成：
野生型毒株（需要突變的原始染色體）
一次同源重組的突變株
二次同源重組的突變株
質(zhì)粒載體本身（隨著自殺質(zhì)粒本身的特性，而在宿主菌中消失）
同源重組后含有野生型基因組的重組質(zhì)粒（也隨著自殺質(zhì)粒的特性，在宿主菌中消失）

我的問題是，野生型的毒株是如何消失的？第一次同源重組與第二次同源重組的原理是什么？
謝謝

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1樓 2011-05-16 10:31:03

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zier1011

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野生型的毒株是如何消失的？——隨著自殺性質(zhì)粒的轉(zhuǎn)入，野生型毒株在嚴(yán)格意義上就不存在了，因?yàn)榇藭r(shí)的菌株中含有質(zhì)粒（質(zhì)粒尚未在傳代中丟失）。
我倒是和納悶質(zhì)粒所攜帶的基因什么情況下會(huì)跟宿主基因組基因發(fā)生重組？

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2樓2011-05-16 14:35:15

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為什么野生型毒株在嚴(yán)格意義上就不存在了，你解釋的原因我不是很明白。

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3樓2011-05-16 15:41:26

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引用回帖:

Originally posted by biofind at 2011-05-16 10:31:03:
一般用于基因突變。
將突變的目的基因克隆到自殺性質(zhì)粒載體上，通過接合等使其進(jìn)入宿主，由于在宿主菌中不存在復(fù)制基因啟始所需的復(fù)制蛋白（如Pi蛋白等），其無(wú)法復(fù)制，在外界選擇性壓力的作用下,自殺性質(zhì)粒載體 ...

為什么野生型毒株在嚴(yán)格意義上就不存在了，你解釋的原因我不是很明白。

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4樓2011-05-16 15:42:07

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zier1011

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Originally posted by zier1011 at 2011-05-16 14:35:15:
野生型的毒株是如何消失的？——隨著自殺性質(zhì)粒的轉(zhuǎn)入，野生型毒株在嚴(yán)格意義上就不存在了，因?yàn)榇藭r(shí)的菌株中含有質(zhì)粒（質(zhì)粒尚未在傳代中丟失）。
我倒是和納悶質(zhì)粒所攜帶的基因什么情況下會(huì)跟宿主基因組基因發(fā)生 ...

如果你轉(zhuǎn)了質(zhì)粒進(jìn)去，這時(shí)候的菌株就含有質(zhì)粒了，雖然其質(zhì)粒不能隨菌株傳代而進(jìn)行復(fù)制，但只要其含有質(zhì)粒就不再是野生型的菌株了，您不明白的是什么地方？

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5樓2011-05-16 16:31:19

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利用自殺質(zhì)粒的目的是為了對(duì)細(xì)菌的基因組進(jìn)行突變，有的菌會(huì)轉(zhuǎn)入自殺質(zhì)粒，從而形成突變菌，但是有的菌不會(huì)轉(zhuǎn)入質(zhì)粒的，那么你怎么講這些突變的菌從未突變的菌區(qū)分呢？

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6樓2011-05-17 13:38:31

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wolfebst(金幣+3, EPI+1): 獎(jiǎng)勵(lì)一下 2011-05-18 15:34:50

野生型的毒株是如何消失的？
答：這個(gè)要看你基因敲除是給基因中間插入的是什么片段了，如果是一段帶有抗生素的片段，那么在篩選突變體的過程中我可以加入大量的該抗生素，導(dǎo)致野生型菌株死去，而帶有抗生素片段的敲除基因（已經(jīng)重組至染色體上）則會(huì)生存。

第一次同源重組與第二次同源重組的原理是什么？

一次重組就是帶有敲除基因的片段和正�；虻钠味荚谌旧w上；而二次重組完全就是將目的基因敲除后整合至染色體上了，如果一般達(dá)到一次重組了，繼續(xù)在抗生素的板子上篩選和進(jìn)行PCR驗(yàn)證就可以最終得到突變體了！

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7樓2011-05-18 15:27:30

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jimjohntall

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各位大俠有沒有用自殺質(zhì)粒pPR-UF1做過突變，在下想請(qǐng)教一二。

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8樓2012-01-13 14:35:49

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