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自殺質(zhì)粒
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一般用于基因突變。 將突變的目的基因克隆到自殺性質(zhì)粒載體上，通過接合等使其進(jìn)入宿主，由于在宿主菌中不存在復(fù)制基因啟始所需的復(fù)制蛋白（如Pi蛋白等），其無法復(fù)制，在外界選擇性壓力的作用下,自殺性質(zhì)粒載體所攜帶的突變基因就與宿主染色體上的野生型發(fā)生基因發(fā)生二次同源重組，產(chǎn)生了帶有突變的突變株； 而質(zhì)粒載體自身由于自殺性特性連同染色體上原有的野生型基因一起隨著細(xì)菌的傳代從菌體內(nèi)消失。 至于一次重組的突變株，可借助質(zhì)粒上的某些選擇基因（如sacB，sucrose敏感）篩除。 這是“自殺質(zhì)�！钡囊恍┰硇缘膯栴}，根據(jù)以上我想到了，在用自殺質(zhì)粒實(shí)現(xiàn)突變的過程中，會(huì)有以下幾種中間產(chǎn)物的形成： 野生型毒株（需要突變的原始染色體） 一次同源重組的突變株 二次同源重組的突變株 質(zhì)粒載體本身（隨著自殺質(zhì)粒本身的特性，而在宿主菌中消失） 同源重組后含有野生型基因組的重組質(zhì)粒（也隨著自殺質(zhì)粒的特性，在宿主菌中消失） 我的問題是，野生型的毒株是如何消失的？第一次同源重組與第二次同源重組的原理是什么？ 謝謝 |
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wolfebst(金幣+3, EPI+1): 獎(jiǎng)勵(lì)一下 2011-05-18 15:34:50
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野生型的毒株是如何消失的？ 答：這個(gè)要看你基因敲除是給基因中間插入的是什么片段了，如果是一段帶有抗生素的片段，那么在篩選突變體的過程中我可以加入大量的該抗生素，導(dǎo)致野生型菌株死去，而帶有抗生素片段的敲除基因（已經(jīng)重組至染色體上）則會(huì)生存。 第一次同源重組與第二次同源重組的原理是什么？ 一次重組就是帶有敲除基因的片段和正�；虻钠味荚谌旧w上；而二次重組完全就是將目的基因敲除后整合至染色體上了，如果一般達(dá)到一次重組了，繼續(xù)在抗生素的板子上篩選和進(jìn)行PCR驗(yàn)證就可以最終得到突變體了！ |
7樓2011-05-18 15:27:30
zier1011
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2樓2011-05-16 14:35:15
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