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生命核心木蟲 (正式寫手)
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[求助]
pcr產(chǎn)物問題請教大家
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| 梯度PCR，50-60退火。其他條件常規(guī)，每個溫度都有得到產(chǎn)物，設(shè)定的產(chǎn)物大小70bp，據(jù)marker判斷為40-60之間，引物20bp左右，應(yīng)該不是二聚體，膠濃度3%。多次做結(jié)果基本一致，比較疑惑，請教大家！謝謝了！ |
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2樓2011-05-23 17:05:06
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4樓2011-05-23 20:34:12
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5樓2011-05-23 20:36:13
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【答案】應(yīng)助回帖
生命核心(金幣+3): 好的 非常感謝 準(zhǔn)備PAGE膠 2011-05-24 09:18:44
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從你的描述中感覺不確定是否缺失了堿基對吧？ 1.你用的Marker是100bp最小單位？換更小的Marker精確定下分子量。 2.做個TA克隆測序。 3.不爽的話跑PAGE膠  。4.結(jié)合你下一步實驗，假設(shè)目前P的產(chǎn)物正確，繼續(xù)實驗。因為確定P出了大小差不多的東西，而且很干凈。除了模板有問題，基本不會因為PCR過程導(dǎo)致的缺失。所以在實驗代價可以承受范圍內(nèi)，可以選擇繼續(xù)實驗。 |
6樓2011-05-23 22:03:45
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