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songwangpan金蟲(chóng) (小有名氣)
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[求助]
用葡萄糖氧化酶做循環(huán)伏安法時(shí)候出不來(lái)峰值
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我在鐵氰化鉀溶液中用循環(huán)伏安法測(cè)試，可以出的來(lái)峰值 但是在電極上加入葡萄糖氧化酶后，在葡萄糖+PBS溶液中，用循環(huán)伏安法測(cè)試， 卻出不了峰值 是因?yàn)槊甘Щ钸�是因?yàn)閯e而原因呢，平時(shí)酶都是在4℃下保存，操作也基本沒(méi)有在 室溫下太久 PS. 之前如果把酶滴在材料上，酶會(huì)消失，現(xiàn)在的方法是把酶和材料混合在一起， 再滴入電極上 |
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【答案】應(yīng)助回帖
songwangpan(金幣+12): 你說(shuō)的和我做的是一樣的，那通氮?dú)獬醯腜BS里到底需不需要加上葡萄糖呀？ 2011-05-27 10:33:34
justinzhao(ECEPI+1): 獎(jiǎng)勵(lì)應(yīng)助！呵呵 2011-05-27 11:48:35
justinzhao(ECEPI+1): 獎(jiǎng)勵(lì)應(yīng)助！呵呵 2011-05-27 11:48:35
| 同學(xué) 估計(jì)你是在打磨后的電極表面上修飾了納米材料吧 這個(gè)時(shí)候 你應(yīng)該把空白電極和修飾好了的電極在鐵氰化鉀溶液（最好選用鐵氰化鉀、亞鐵氰化鉀電對(duì)（5mM, 1:1）并以以0.1M KCl為支持電解質(zhì)）中做CV掃描，如果你的修飾物為導(dǎo)電的，則修飾電極的電流應(yīng)該比空白電極大，這只是證明納米材料可以導(dǎo)電的。嗯，之后你可能是用滴涂法在電極表面滴涂GOD吧，假設(shè)你的GOD固定在了電極表面且沒(méi)有失活 那么在通氮除氧的PBS中，在0.1V到-0.7V的電位窗口，能夠在-0.4到-0.6V左右（SCE、Ag/AgCl）能夠看到GOD的循環(huán)伏安峰。如果沒(méi)有，那么你的GOD多半沒(méi)有固定上去。失沒(méi)失活，因?yàn)槲覜](méi)做過(guò)，就不好說(shuō)了，請(qǐng)參照7樓那位同學(xué)的方法試試。此外，向PBS中通氧或者通氮的現(xiàn)象是不同的，請(qǐng)多看看文獻(xiàn)吧。呵呵，恭祝實(shí)驗(yàn)順利。 |
9樓2011-05-26 20:39:45
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3樓2011-05-26 08:41:11
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【答案】應(yīng)助回帖
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justinzhao(金幣+3): 獎(jiǎng)勵(lì)應(yīng)助 2011-05-27 11:48:00
justinzhao(金幣+3): 獎(jiǎng)勵(lì)應(yīng)助 2011-05-27 11:48:00
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在鐵氰化鉀溶液中用循環(huán)伏安法測(cè)試，出峰 ，只能說(shuō)明你的電極沒(méi)問(wèn)題。 在電極上加入葡萄糖氧化酶后，在葡萄糖+PBS溶液中，用循環(huán)伏安法測(cè)試，你掃描的如果是正電位區(qū)，應(yīng)該會(huì)有峰。這個(gè)峰是過(guò)氧化氫產(chǎn)生的。掃負(fù)電位區(qū)，需要除氧，這是酶在電極上的直接電化學(xué)。 判斷是否是酶失活的方法，可以把電極電位設(shè)在+0.8V左右，用電流時(shí)間曲線法，試試加葡萄糖前后是否有電流的變化。 |
7樓2011-05-26 10:39:23
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6樓2011-05-26 10:01:24
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justinzhao(金幣+3): 獎(jiǎng)勵(lì)應(yīng)助 2011-05-27 11:47:04
| 嗯 我覺(jué)得要分成兩個(gè)實(shí)驗(yàn)做：1. 如果在通氮除氧的PBS中作出GOD的氧化還原峰了，建議你先做掃速與峰電流、峰電位的關(guān)系實(shí)驗(yàn)。這個(gè)實(shí)驗(yàn)完成后，就可以向PBS中加入葡萄糖，攪拌，然后停止，在不攪拌的條件下在相同的電位窗口下做循環(huán)伏安實(shí)驗(yàn)，看此時(shí)的還原峰電流或者氧化峰電流有沒(méi)有變化（增大或者減小都可以，有變化就行。我在通氮除氧的PBS得到的結(jié)果是加入葡萄糖后，還原峰電流增大）。2. 如果你在空白PBS中沒(méi)有得到一對(duì)明顯的氧化還原峰，就不用再加入葡萄糖了，因?yàn)闆](méi)有峰出現(xiàn)就說(shuō)明GOD根本沒(méi)上去，即使加入葡萄糖也應(yīng)該沒(méi)有響應(yīng)。 |
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周少爺16樓2011-05-27 11:14:14
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插上一句，我做的是酶電極，不過(guò)不是滴涂法！做酶?jìng)鞲衅�，有的時(shí)候CV圖真的不好做出來(lái)，比如待測(cè)物濃度大了就測(cè)不出來(lái)了等等。后來(lái)我用ＤＰＶ做了，發(fā)現(xiàn)效果很好．但是翻閱文獻(xiàn)，做酶的基本上都是用i-t曲線來(lái)做的，i-t曲線時(shí)間間隔短的話，就會(huì)呈現(xiàn)一個(gè)向下的弧線，而根本就不應(yīng)該是呈階梯狀的曲線。上面有蟲(chóng)友說(shuō)有可能是用 orgin平滑了，我覺(jué)得應(yīng)該有點(diǎn)；但是主要還是他們把時(shí)間拉長(zhǎng)了，比如時(shí)間間隔1min，或者5min，這樣就可以做出階梯狀的曲線。 另外，電極捕捉h2o2是個(gè)相對(duì)緩慢的過(guò)程（相對(duì)與鐵氰化鉀探針?lè)肿觼?lái)說(shuō)），所以說(shuō)做cv圖的時(shí)候是不是得靜止一段時(shí)間，不然數(shù)據(jù)會(huì)很不穩(wěn)定的！ |
23樓2011-06-02 10:35:11
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嗯 請(qǐng)教不敢當(dāng) 說(shuō)實(shí)話 我也不清楚我在此點(diǎn)電位下檢測(cè)的是啥物質(zhì)的還原電流，我當(dāng)時(shí)只是看到GOD的在此電位下出現(xiàn)了一個(gè)還原峰，加入葡萄糖后還原峰電流增大，所以在計(jì)時(shí)電流法中采用此電位為工作電位 后一個(gè)問(wèn)題 我想問(wèn)下您看到的是什么電極作為工作電極了 我所看個(gè)的幾篇文獻(xiàn) 因?yàn)槭遣捎醚t蛋白、辣根過(guò)氧化物酶、細(xì)胞色素c修飾物制備的 所以它的還原電位是在負(fù)電位區(qū) |
24樓2011-06-02 11:06:23
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