 |
 |
 |
| 24小時(shí)熱門版塊排行榜 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 5 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 3016 | 回復(fù): 7 | ||||
| 本帖產(chǎn)生 1 個(gè) MolEPI ，點(diǎn)擊這里進(jìn)行查看 | ||||
| 當(dāng)前只顯示滿足指定條件的回帖，點(diǎn)擊這里查看本話題的所有回帖 | ||||
[交流]
關(guān)于Western blot的抗體孵育階段
|
||||
|
Western blot 麗春紅染色已經(jīng)確定轉(zhuǎn)膜成功了，但是孵育后顯色沒(méi)有條帶。 我介紹一下我的實(shí)驗(yàn)過(guò)程： 一抗：Anti-His-HRP 二抗：HRP-Rabbit-Anti-Mouse lgG 一抗，二抗都是用封閉液按1:5000稀釋 使用的溶液如下（按照抗體說(shuō)明書配制的）： PBS  137 mM NaCl, 2.7 mM KCl, 10 mM Na2HPO4, 1.8mM KH2PO4PBST PBS +0.05% Tween-20,v/v)Blocking buffer PBST + 5% nonfat, dry milk, w/v)孵育時(shí)，我把膜放到一個(gè)塑料樣品袋中，然后加入抗體稀釋劑，一抗過(guò)夜孵育，二抗孵育一小時(shí)，這樣在樣品袋中孵育是不是不利于抗體與膜上蛋白的結(jié)合，對(duì)孵育效果產(chǎn)生影響？怎樣結(jié)合效果才好呢？ 顯色步用的是 3%的4-氯-1-萘酚+30%雙氧水+50mM的Tris-Hcl 室溫下浸泡震蕩大約30分鐘（也是根據(jù)抗體說(shuō)明書上面的方法）。 希望大家?guī)椭。?br /> [ Last edited by 爛鐵 on 2011-5-25 at 14:22 ] |
回復(fù)此樓» 收錄本帖的淘帖專輯推薦
 【分子生物】EPI帖 |
» 猜你喜歡
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)中的趣事：實(shí)驗(yàn)器材的 “烏龍”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)中的趣事：和實(shí)驗(yàn)材料的 “斗智斗勇”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤(rùn)色/翻譯怎么收費(fèi)?
已經(jīng)有79人回復(fù)
-
蛋白質(zhì)檢測(cè)：精準(zhǔn)分析，解鎖生物分子的密碼
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之小鼠實(shí)驗(yàn)：嚴(yán)謹(jǐn)設(shè)計(jì)，解析生命機(jī)制的重要載體
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之重金屬檢測(cè)：精準(zhǔn)篩查，守護(hù)健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“蛙測(cè)重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標(biāo)南京
已經(jīng)有0人回復(fù)
» 本主題相關(guān)價(jià)值貼推薦，對(duì)您同樣有幫助:
- Western Blot實(shí)驗(yàn)的蛋白條帶都連在一起
已經(jīng)有37人回復(fù)
- WB抗體孵育問(wèn)題！
已經(jīng)有7人回復(fù)
- 關(guān)于western blot的一兩個(gè)實(shí)驗(yàn)疑問(wèn)。
已經(jīng)有6人回復(fù)
- western抗體稀釋、孵育的時(shí)間與條件的疑惑與不解
已經(jīng)有10人回復(fù)
- 新手求助western blot
已經(jīng)有22人回復(fù)
- 【求助/交流】westernblot
已經(jīng)有10人回復(fù)
- 【求助/交流】western blot
已經(jīng)有35人回復(fù)
- 【求助/交流】western-blot 一抗孵育時(shí)間是不是越長(zhǎng)越好
已經(jīng)有7人回復(fù)
» 搶金幣啦！回帖就可以得到:
-
中國(guó)科學(xué)院杭州醫(yī)學(xué)研究-常皓研究員課題組博士后招聘
+1/276
-
西南交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院招收生物醫(yī)學(xué)工程和材料與化工專業(yè)碩士研究生
+1/184
-
福建師范大學(xué)葉應(yīng)祥課題組招收2026級(jí)博士研究生
+2/130
-
Postdoc position in Hangzhou Normal University （陳健翔組博后招聘）
+1/84
-
江南大學(xué)招收具有3年海外博后經(jīng)歷的青年教師
+1/82
-
中飛院航空鋰電池團(tuán)隊(duì)接受碩士生調(diào)劑
+1/78
-
春天就該逛吃逛吃
+1/75
-
祈福2026國(guó)基面上項(xiàng)目
+5/70
-
飄在美國(guó)，有點(diǎn)想家
+1/49
-
招收材料相關(guān)碩士研究生
+2/44
-
雙一流大學(xué)湘潭大學(xué)“化工過(guò)程模擬與強(qiáng)化”國(guó)家地方聯(lián)合工程研究中心招收各類博士生
+1/17
-
2026年材料/冶金/化工碩士調(diào)劑-上海大學(xué)全國(guó)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室-激光冶金與硅基材料制備
+1/17
-
招收專業(yè)代碼08的學(xué)碩！
+1/14
-
寧波東方理工大學(xué)余鵬課題組2026年上海交大聯(lián)培博士生、博士后、科研助理招聘
+1/8
-
中國(guó)人民大學(xué)物理學(xué)系蔡鵬課題組招收優(yōu)秀碩士博士研究生
+1/7
-
211/雙一流---石河子大學(xué)---有機(jī)化學(xué)方向招調(diào)劑生
+1/5
-
寧波東方理工大學(xué)余鵬課題組2026年上海交大聯(lián)培博士生、博士后、科研助理招聘
+1/5
-
浙江大學(xué)高純分離團(tuán)隊(duì)誠(chéng)聘博士后
+1/1
-
211/雙一流石河子大學(xué)化學(xué)化工學(xué)院-電池/電催化研究方向
+1/1
-
湘潭大學(xué)教師招聘
+1/1
3樓2011-05-26 03:12:05
2樓2011-05-25 16:29:10
雪山飛狐7233
鐵桿木蟲 (著名寫手)
- MolEPI: 3
- 應(yīng)助: 10 (幼兒園)
- 金幣: 18826.4
- 帖子: 1530
- 在線: 199.1小時(shí)
- 蟲號(hào): 593313
★ ★ ★ ★ ★ ★
小木蟲(金幣+0.5):給個(gè)紅包，謝謝回帖
西瓜(金幣+5, EPI+1): 很有經(jīng)驗(yàn)，明顯是專家！P.S. 三塔是指Santa Cruz吧？ 2011-05-26 12:33:21
爛鐵(金幣+10): 2011-05-26 14:10:40
小木蟲(金幣+0.5):給個(gè)紅包，謝謝回帖
西瓜(金幣+5, EPI+1): 很有經(jīng)驗(yàn)，明顯是專家！P.S. 三塔是指Santa Cruz吧？ 2011-05-26 12:33:21
爛鐵(金幣+10): 2011-05-26 14:10:40
|
1. 我不知道你的抗體是什么牌子的，如果是三塔之類的抗體1:5000顯然是抗體的濃度太低，可以加大濃度，三塔的抗體一般我都用到1:1000/500，即使是AbCOM，cell signaling你的濃度也低，說(shuō)明書只能說(shuō)在最佳條件下才能有效（這種條件一般都不具備）。還有是不是能有個(gè)陽(yáng)性結(jié)果作為對(duì)照（比如別人做出過(guò)來(lái)），當(dāng)然抗體的批號(hào)要一致的。 2. 一抗封閉過(guò)夜最好在4度層析室或者層析柜里進(jìn)行，如果在室溫會(huì)嚴(yán)重影響抗體的效價(jià)。 3. 二抗封閉時(shí)間應(yīng)該超過(guò)二小時(shí)，可以在室溫進(jìn)行。 4. 一抗， 二抗封閉之前應(yīng)該用TBST(你的應(yīng)該是PBST)洗3次，10min/次。 5. 顯色我們用自配的 PCA Lum 1M Tris-Hcl(pH8.5) H2O2 H2O 個(gè)人感覺(jué)非常好用。 [ Last edited by 雪山飛狐7233 on 2011-5-26 at 06:00 ] |
4樓2011-05-26 05:57:14
★ ★ ★ ★
小木蟲(金幣+0.5):給個(gè)紅包，謝謝回帖
西瓜(金幣+3): 歡迎交流經(jīng)驗(yàn) 2011-05-26 12:34:06
爛鐵(金幣+5): 2011-05-26 14:10:48
小木蟲(金幣+0.5):給個(gè)紅包，謝謝回帖
西瓜(金幣+3): 歡迎交流經(jīng)驗(yàn) 2011-05-26 12:34:06
爛鐵(金幣+5): 2011-05-26 14:10:48
|
我們都是封閉過(guò)夜的，第二天做抗體反應(yīng)實(shí)驗(yàn)！基本上都是一小時(shí)！ 還有向樓上所說(shuō)，抗體的濃度你參考說(shuō)明書，至少要預(yù)實(shí)驗(yàn)看看那個(gè)濃度合適！ 實(shí)驗(yàn)不是一次就做好的，要摸索幾次的，一次做好就太簡(jiǎn)單了！祝你好運(yùn)，加油！ |
5樓2011-05-26 09:15:23
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 一志愿武理085500機(jī)械專業(yè)總分300求調(diào)劑 +3 | an10101 2026-03-24 | 7/350 |
|
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 調(diào)劑 +4 | 13853210211 2026-03-24 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 材料學(xué)碩333求調(diào)劑 +3 | 北道巷 2026-03-24 | 3/150 |
|
|
|
[考研]
材料學(xué)碩，求調(diào)劑
6+3
|
糖葫蘆888ll 2026-03-22 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 材料292調(diào)劑 +8 | 橘頌思美人 2026-03-23 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 081700 調(diào)劑 267分 +9 | 迷人的哈哈 2026-03-23 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 276求調(diào)劑。有半年電池和半年高分子實(shí)習(xí)經(jīng)歷 +9 | 材料學(xué)257求調(diào)劑 2026-03-23 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑 +7 | 十三加油 2026-03-21 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 341求調(diào)劑(一志愿湖南大學(xué)070300) +5 | 番茄頭--- 2026-03-22 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 一志愿國(guó)科過(guò)程所081700，274求調(diào)劑 +3 | 三水研0水立方 2026-03-23 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 材料/農(nóng)業(yè)專業(yè)，07/08開(kāi)頭均可，過(guò)線就行 +3 | 呵唔哦豁 2026-03-23 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 化學(xué)308分求調(diào)劑 +3 | 你好明天你好 2026-03-23 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 306求調(diào)劑 +9 | chuanzhu川燭 2026-03-18 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 求老師收我 +3 | zzh16938784 2026-03-23 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 287求調(diào)劑 +8 | 晨昏線與星海 2026-03-19 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 298求調(diào)劑一志愿211 +3 | 上岸6666@ 2026-03-20 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 材料學(xué)碩301分求調(diào)劑 +7 | Liyouyumairs 2026-03-21 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 299求調(diào)劑 +5 | shxchem 2026-03-20 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 南京大學(xué)化學(xué)376求調(diào)劑 +3 | hisfailed 2026-03-19 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑 +3 | eation27 2026-03-20 | 3/150 |
|