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a83875785鐵桿木蟲 (著名寫手)
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[求助]
關(guān)于western blot的一兩個實(shí)驗疑問。
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1.我的二抗是驢抗羊，洗二抗1小時后發(fā)現(xiàn)背景還是很深，這時我能把膜再拿回來，重新多洗1小時，再加ecl曝光顯色嗎？ 2.第二個問題是：二抗本來是室溫下側(cè)擺搖床孵育2h的，可是別人占用著，這時我放到4度的冰箱的搖床上孵育，得孵育多久？ |
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a83875785
鐵桿木蟲 (著名寫手)
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2樓2011-06-13 17:46:17
3樓2011-06-14 11:39:15
睡著數(shù)綿羊
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4樓2011-06-14 14:42:01
nicknelson
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5樓2011-06-14 15:07:16
jsk10
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【答案】應(yīng)助回帖
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silicare(金幣+1): 謝謝參與 2011-06-14 18:25:10
a83875785(金幣+1): 2011-06-14 21:34:14
silicare(金幣+1): 謝謝參與 2011-06-14 18:25:10
a83875785(金幣+1): 2011-06-14 21:34:14
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1、多洗是沒用的，抗體已牢牢吸附在膜上了，解決辦法是轉(zhuǎn)膜后進(jìn)行封閉時，封封閉液濃度稍微加大，或延長封閉時間，使封閉更完全；降低二抗?jié)舛然蚨狗跤龝r間。 2、二抗孵育即使在室溫下也不需要太長時間的，我們做的話室溫或37度30min即可，最多1h，要是4度的話可適當(dāng)延長時間，2h也是足夠可以了。 以上為本人實(shí)驗室條件下的情況及參數(shù)，希望有幫助。 |
6樓2011-06-14 18:09:59
7樓2011-07-16 10:26:33
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