 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 6 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 1342 | 回復(fù): 5 | |||
qyqy512銅蟲 (初入文壇)
|
[求助]
PCR沒有結(jié)果
|
| 本人要做構(gòu)建表達(dá)載體，可是目的條帶p不出來，引物是根據(jù)NCBI上已經(jīng)公布的序列設(shè)計的編碼區(qū)，說明引物應(yīng)該是沒問題的；模板可以p出其它基因，唯獨目的基因p不出來，溫度梯度40-70℃都試過了，模板梯度也試過了，都出不來，只有一次在57℃時出來了非常淡的條帶，50ul體系電泳就跟平時5ul電泳結(jié)果差不多，割膠回收之后連接沒成功，之后再怎么也p不出來了。請高手指教！��！很急�。。�！ |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
不合理蛙科研實驗之小鼠實驗：嚴(yán)謹(jǐn)設(shè)計，解析生命機(jī)制的重要載體
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗之重金屬檢測：精準(zhǔn)篩查，守護(hù)健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤色/翻譯怎么收費?
已經(jīng)有242人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗之“蛙測重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標(biāo)南京
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
留學(xué)--博士招生
已經(jīng)有16人回復(fù)
-
化學(xué)工程，本211，求調(diào)劑，ab區(qū)不限
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
邵陽學(xué)院食品與化學(xué)工程學(xué)院碩士調(diào)劑
已經(jīng)有0人回復(fù)
» 本主題相關(guān)價值貼推薦，對您同樣有幫助:
- pcr一直不出結(jié)果，可以從哪些方面調(diào)整
已經(jīng)有13人回復(fù)
- 關(guān)于PCR無結(jié)果的原因
已經(jīng)有20人回復(fù)
- 轉(zhuǎn)基因檢測結(jié)果不穩(wěn)定，有時有，有時沒有，求高人解釋
已經(jīng)有6人回復(fù)
- 求助！關(guān)于RT-PCR的問題！
已經(jīng)有20人回復(fù)
- PCR 總是呈現(xiàn)涂抹狀 求解答！
已經(jīng)有39人回復(fù)
- 農(nóng)桿菌菌液PCR沒有結(jié)果
已經(jīng)有10人回復(fù)
- 【求助/交流】PCR沒有結(jié)果，希望高手指教
已經(jīng)有29人回復(fù)
- 【求助/交流】基因克隆時，酶切有結(jié)果，PCR卻P不出來
已經(jīng)有11人回復(fù)
- 【求助/交流】菌落PCR問題
已經(jīng)有23人回復(fù)
- 【求助/交流】大家覺得這個結(jié)果怎么解釋？
已經(jīng)有14人回復(fù)
- 【求助/交流】關(guān)于PCR的問題
已經(jīng)有18人回復(fù)
- 【分享】PCR總是沒有結(jié)果呢
已經(jīng)有6人回復(fù)
- 【求助/交流】PCR同一體系、溫度結(jié)果卻不同
已經(jīng)有18人回復(fù)
cdl007
木蟲 (正式寫手)
- MolEPI: 41
- 應(yīng)助: 46 (小學(xué)生)
- 貴賓: 0.025
- 金幣: 2570.6
- 紅花: 11
- 帖子: 545
- 在線: 123.1小時
- 蟲號: 275133
- 注冊: 2006-08-27
- 專業(yè): 腫瘤病因
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★
amisking(金幣+2): 鼓勵應(yīng)助 2011-05-25 19:54:06
qyqy512(金幣+1): hsp基因，2000bp，引物是老師給設(shè)計的，自己也不知道，pcr體系是酶0.8ul、引物各1ul、dntp4ul、buffer5ul、模板1ul，總共50ul體系。用得是艾德萊的taq，艾德萊的高保真酶也用過，也p不出來 2011-05-26 08:22:21
amisking(金幣+2): 鼓勵應(yīng)助 2011-05-25 19:54:06
qyqy512(金幣+1): hsp基因，2000bp，引物是老師給設(shè)計的，自己也不知道，pcr體系是酶0.8ul、引物各1ul、dntp4ul、buffer5ul、模板1ul，總共50ul體系。用得是艾德萊的taq，艾德萊的高保真酶也用過，也p不出來 2011-05-26 08:22:21
|
建議以后問問題要專業(yè)一點，像您這樣只簡單描述一下的話，沒有辦法得到有質(zhì)量的回復(fù) 最好有圖、數(shù)據(jù) 哪個基因，擴(kuò)多少bp？引物序列？pcr體系？什么酶？ |
2樓2011-05-25 19:52:36
空谷幽風(fēng)
金蟲 (正式寫手)
- MolEPI: 32
- 應(yīng)助: 13 (小學(xué)生)
- 貴賓: 0.05
- 金幣: 1106.1
- 散金: 500
- 紅花: 13
- 帖子: 615
- 在線: 116.5小時
- 蟲號: 714271
- 注冊: 2009-03-04
- 性別: GG
- 專業(yè): 生物大分子結(jié)構(gòu)與功能
3樓2011-05-25 20:13:15
bbwalkman
木蟲 (小有名氣)
- MolEPI: 6
- 應(yīng)助: 43 (小學(xué)生)
- 金幣: 2334.5
- 紅花: 3
- 帖子: 240
- 在線: 171.7小時
- 蟲號: 1279904
- 注冊: 2011-04-28
- 性別: GG
- 專業(yè): 生化分析及生物傳感
4樓2011-05-25 20:47:17
chachaxionga
新蟲 (正式寫手)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 729.3
- 散金: 90
- 帖子: 308
- 在線: 194小時
- 蟲號: 1018929
- 注冊: 2010-05-15
- 性別: MM
- 專業(yè): 獸醫(yī)寄生蟲學(xué)
|
我也想問同樣的問題，最近在做RT和gene walking，這個基因根據(jù)NCBI上的序列設(shè)計引物，RT擴(kuò)增出來過一次，測序有突變，有多個終止子出現(xiàn)，因為后面要對蛋白表達(dá)進(jìn)行亞細(xì)胞定位，所以要想再再，但是之后就再也沒有擴(kuò)出來過，換過最近推薦比較好用的酶，同時換過引物之后，RT擴(kuò)出800多的片段，本來是應(yīng)該2900多，還是往下游做了一下，測序跟公布的cDNA 比對，這個前后完全匹配，就是中間完全缺失了2000多，望高人指點。 基因組長距離擴(kuò)增，想先拿到一部分序列，再做walking，一步一步拿到完整的基因組序列，長距離擴(kuò)增時，拿到一部分序列，約3000bp，但是之后walking一直沒有結(jié)果，只是在點樣孔出有東西，剛開始懷疑模板量多了，之后減少了模板量，但還是沒有結(jié)果 |
5樓2011-06-07 16:24:21
wuzuobin125
銅蟲 (小有名氣)
- MolEPI: 1
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 228.2
- 帖子: 250
- 在線: 17.9小時
- 蟲號: 529482
- 注冊: 2008-03-20
- 專業(yè): 系統(tǒng)生物學(xué)
6樓2011-06-07 16:51:41
相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 qyqy512 的主題更新
| 6 | 1/1 | 返回列表 |
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 調(diào)劑310 +7 | 溫柔的晚安 2026-03-25 | 8/400 |
|
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 298求調(diào)劑 +3 | 種圣賜 2026-03-28 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 數(shù)一英一271專碩（085401）求調(diào)劑，可跨 +7 | 前行必有光 2026-03-28 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 332求調(diào)劑 +4 | @MZB382400 2026-03-28 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 一志愿華北電力大學(xué)能動專碩，293，求調(diào)劑 +3 | 15537177284 2026-03-23 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 299求調(diào)劑 +7 | 嗯嗯嗯嗯2 2026-03-27 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 291求調(diào)劑 +15 | hhhhxn.. 2026-03-23 | 21/1050 |
|
|
|
[考研] 一志愿上海理工能源動力（085800）310分求調(diào)劑 +3 | zhangmingc 2026-03-27 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑 +4 | 零八# 2026-03-27 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 一志愿吉大071010，316分求調(diào)劑 +3 | xgbiknn 2026-03-27 | 3/150 |
|
|
|
[考研]
 304材料求調(diào)劑
+4
|
鐘llll 2026-03-26 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 081200-11408-276學(xué)碩求調(diào)劑 +3 | 崔wj 2026-03-26 | 3/150 |
|
|
|
[考研]
 085602化學(xué)工程求調(diào)劑。
+4
|
平樂樂樂 2026-03-26 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 281求調(diào)劑 +6 | Koxui 2026-03-24 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 263求調(diào)劑 +6 | yqdszhdap－ 2026-03-22 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 07化學(xué)303求調(diào)劑 +5 | 睿08 2026-03-25 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 材料專碩 335 分求調(diào)劑 +4 | 拒絕冷暴力 2026-03-25 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 網(wǎng)絡(luò)空間安全0839招調(diào)劑 +4 | w320357296 2026-03-25 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 282求調(diào)劑 +3 | wcq131415 2026-03-24 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 269求調(diào)劑 +4 | 我想讀研11 2026-03-23 | 4/200 |
|