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biofeixue木蟲 (著名寫手)
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[求助]
沒有polyA怎么逆轉(zhuǎn)錄？
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我最近查了一些基因，想看看他們受環(huán)境的影響是表達(dá)多了還是少了？ 結(jié)果發(fā)現(xiàn)這些基因的3端都沒有polyA尾巴，為什么？另外如果沒有polyA尾巴，我怎么逆轉(zhuǎn)錄？ |
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yabxxh
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【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★ ★
biofeixue(金幣+5): 2011-05-27 09:30:18
西瓜(金幣+5, EPI+1): 一般試劑盒都配有隨機(jī)引物（一般是random 6 mers）和Oligo dT，樓主用隨機(jī)引物做反轉(zhuǎn)錄就可以了。也可以自己設(shè)計(jì)基因特異的引物來反轉(zhuǎn)錄，跟PCR引物差不多。推薦前者。 2011-05-27 12:56:37
biofeixue(金幣+5): 2011-05-27 09:30:18
西瓜(金幣+5, EPI+1): 一般試劑盒都配有隨機(jī)引物（一般是random 6 mers）和Oligo dT，樓主用隨機(jī)引物做反轉(zhuǎn)錄就可以了。也可以自己設(shè)計(jì)基因特異的引物來反轉(zhuǎn)錄，跟PCR引物差不多。推薦前者。 2011-05-27 12:56:37
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...，基因的話，按照其結(jié)構(gòu)應(yīng)該是有polyA的，可能你找的是編碼區(qū)吧。 沒有polya的話你可以用隨機(jī)引物，或者你自己的特定引物來反轉(zhuǎn)錄啊 好運(yùn) |
2樓2011-05-27 09:29:18
yujiaping1
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3樓2011-05-27 12:30:56
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4樓2011-05-27 13:58:39
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西瓜
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dhd997(金幣+2): 熱心鼓勵(lì)一下 2011-05-27 19:27:26
dhd997(金幣+2): 熱心鼓勵(lì)一下 2011-05-27 19:27:26
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定量用的熒光定量PCR是用特異引物的，所以一般可以反轉(zhuǎn)錄出總的cDNA，這樣子一份cDNA樣品可以檢測(cè)多個(gè)基因。定量時(shí)除了擴(kuò)展目的基因，還需擴(kuò)增actin、tublin等內(nèi)參基因，作為樣品量的校正。 如果在反轉(zhuǎn)錄時(shí)就用特異引物，那就浪費(fèi)反轉(zhuǎn)錄酶啦。然后內(nèi)參怎么做呢？ 用特異性引物作反轉(zhuǎn)錄我是聽說過，不過自己沒做過，也許有些方面用特異性引物更好。請(qǐng)指教哦  |
6樓2011-05-27 14:06:53
yj507
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7樓2011-05-27 17:12:45
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