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qyqy512銅蟲 (初入文壇)
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[求助]
菌液pcr檢測不對
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| 最近做連接，菌液pcr檢測條帶不對，目的條帶是2000左右，菌液pcr出來是1000，做了兩次連接，都是這樣的結(jié)果。求助高手啊 |
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2樓2011-05-28 15:37:34
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3樓2011-05-28 15:55:10
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4樓2011-05-28 16:12:17
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【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★
qyqy512(金幣+1): 謝謝 2011-05-30 08:34:00
wanhscn(金幣+3, MolEPI+1): Good！對樓主有幫助！經(jīng)決定，授予專家指數(shù)。 2011-09-24 08:48:00
qyqy512(金幣+1): 謝謝 2011-05-30 08:34:00
wanhscn(金幣+3, MolEPI+1): Good！對樓主有幫助！經(jīng)決定，授予專家指數(shù)。 2011-09-24 08:48:00
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樓主可以提供下克隆載體的大小嗎？如果我估計的沒錯，應(yīng)該是空載的假陽性（or 只轉(zhuǎn)化進了極少目的片段，所以能夠用你的特異引物擴增），測序后就是你的載體片段。 這種情況我遇到過，我當時的PCR目的片段1200bp，但是最后篩選出來，1000bp和1200bp都有，我當時以為片段在不同種中的差異很大，就都測序了一些。結(jié)果1000bp的是空載的假陽性。 建議樓主也可以送一兩個樣測測序，畢竟也不貴。再就是優(yōu)化連接及轉(zhuǎn)化條件，減少假陽性的概率。 個人經(jīng)驗，希望有所幫助~~ |
7樓2011-05-30 00:13:42
herethere
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8樓2011-09-23 20:26:54
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