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biofeixue木蟲 (著名寫手)
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[求助]
為什么內(nèi)參可用rRNA?
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| 看到很多文章里寫用rRNA做內(nèi)參的？不知道怎么做內(nèi)參？內(nèi)參不是用來標(biāo)定各樣品的cDNA量是不是一致的嗎？如果用rRNA做內(nèi)參，rRNA在反轉(zhuǎn)錄時，不能轉(zhuǎn)錄成cDNA，它又怎么來標(biāo)定模板是不是一樣的呢？ |
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cdl007
木蟲 (正式寫手)
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【答案】應(yīng)助回帖
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amisking(金幣+5, EPI+1): 鼓勵應(yīng)助 2011-05-28 22:09:47
biofeixue(金幣+10): 非常感謝！ 2011-05-29 04:26:53
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18s rRNA作為內(nèi)參標(biāo)準(zhǔn)在RT-PCR運用中，以穩(wěn)定表達(dá)著稱。其優(yōu)于GAPDH和beta-actin。 oligo（dT）反轉(zhuǎn)錄不能用18s rRNA作為內(nèi)參,隨機(jī)引物可以! 18SrRNA雖然不會有蛋白表達(dá)，但是它會反轉(zhuǎn)，形成18S核糖體RNA 90%以上的RT-PCR應(yīng)用單一的內(nèi)參基因來校正與標(biāo)準(zhǔn)化目標(biāo)基因的表達(dá)，其中最常用的包括GAPDH、β-actin、18S rRNA和28S rRNA等。 GAPDH mRNA在不同癌組織(包括肺癌、乳腺癌、腎細(xì)胞癌等)中的表達(dá)升高 ，在不同個體間、懷孕期間以及細(xì)胞周期的不同階段等變化很大 當(dāng)細(xì)胞向惡性轉(zhuǎn)化時，β-actin mRNA的表達(dá)水平增加；而假基因的的存在也可干擾β-actin的檢測。 rRNA用作內(nèi)參還有如下缺點：① 當(dāng)對已純化mRNA中的目標(biāo)基因進(jìn)行定量時，rRNA不能用于標(biāo)準(zhǔn)化；②rRNA高豐度表達(dá)，遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于目標(biāo)mRNA，較其他內(nèi)參基因穩(wěn)定且受RNA降解的影響較小；③ rRNA不包括poly(A)尾，在以oligo(dT)為引物的cDNA合成中不能被逆轉(zhuǎn)錄。 更詳細(xì)的東西可以看看這個網(wǎng)址，總結(jié)的非常好http://www.bioask.cn/html/1100.html |
2樓2011-05-28 19:48:48
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