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biofeixue木蟲 (著名寫手)
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[求助]
請教RNA逆轉及引物設計的各種，急！請大家多多幫助！
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這一些是擬南芥的一些基因（AT5G62690、At2g41110、At3g56800、At1g66410、At2g27030、At5g21274、At3g43810、At4g14640、At3g51920、 At5g37780），我從http://www.arabidopsis.org/以及NCBI上中找到這些基因的cDNA序列，可是發(fā)現他們很大一部分沒有ployA尾巴，因為以前沒有做過分子，所以想請教一下他們在RNA逆轉錄成cDNA時能不能用oligo(d)T做引物？如何把它們從總RNA逆轉錄成cDNA？ AT5G62690是擬南芥Tub2的基因，我看到以下兩篇文章都是從總RNA逆轉錄成cDNA 時就是用的oligo(d)T做引物，用Tub2做內參，可我查的Tub2沒有polya呀？為什么？ 1. Genji Qin, Hongya Gu, Ligeng Ma，et al. Disruption of phytoene desaturase gene results in albino and dwarf phenotypes in Arabidopsis by impairing chlorophyll, carotenoid, and gibberellin biosynthesis. Cell Research (2007) 17:471-482. 2. Genji Qin, Hongya Gu, Yunde Zhao, et al. An Indole-3-Acetic Acid Carboxyl Methyltransferase Regulates Arabidopsis Leaf Development. The Plant Cell, Vol. 17, 2693–2704, October 2005 如果有人能幫我解決我遇到的一系列問題，我愿意請版主將我的500金幣轉給幫我的人！ 我的QQ號，171736752。不知大家能不能在QQ上留個電話，我當面請教！ |
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jhu132llh
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大洪
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【答案】應助回帖
biofeixue(金幣+10): 謝謝！cDNA不是用mRNA逆轉錄的嗎？為什么沒有polyA 2011-05-30 09:11:41
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1.NCBI上中找到這些基因的cDNA序列，可是發(fā)現他們很大一部分沒有ployA尾巴 很正常的 因為NCBI上中找到這些基因的cDNA序列，記住是cDNA序列，不是RNA序列，所以沒有ployA尾是很正常的 2.只要是提取的總RNA，你就可以用oligo(d)T引物來做反轉錄，當然了家電隨機引物也是更好的 3.如何從總RNA逆轉錄成cDNA 這個原理比較簡單： 反轉錄酶在RNA為模板，以oligo(d)T為引物，從ployA尾開始把RNA反轉錄為cDNA，再把RNA剪切掉，最后就只剩下cDNA 方法的話： 可以買一個試劑盒 一步法和兩步法都可以 試劑盒里該有的都有了 然后嚴格按照試劑盒的操作說明來做就可以的了 按照我們實驗室的經驗。個人覺得兩步法的效果要更好點 |
2樓2011-05-30 08:53:29
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