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margersy113新蟲(chóng) (正式寫手)
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[求助]
液相測(cè)定 分不開(kāi)的峰 怎么辦？？謝謝大家了。。
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分不開(kāi)的峰！ 本人現(xiàn)在在用HPLC-ECD檢測(cè)6-OHDA。 文獻(xiàn)流動(dòng)相是：25mM檸檬酸，125mM磷酸鈉（文獻(xiàn)中寫的是sodium phosphate），100mg/lEDTA，30mg/lSOS，配置好后用磷酸調(diào)節(jié)pH至2.5。 在我的實(shí)際操作中，先后試過(guò)pH=3.0, 3.5, 3.8, 4.1。出峰時(shí)間基本在4-6分之間（其中pH3.8出峰時(shí)間相對(duì)最好，在5-6分之間，而且出峰時(shí)間隨著時(shí)間的進(jìn)行一點(diǎn)一點(diǎn)往后移，這也是我很糾結(jié)的地方，懷疑是我操作問(wèn)題，但找不到原因），但是我們測(cè)實(shí)際腦樣品時(shí)，出現(xiàn)了一個(gè)大峰，時(shí)間從2分持續(xù)到5分（有拖尾現(xiàn)象），這樣就影響到了6-OHDA，我們無(wú)法判斷到底是不是6-OHDA。 后來(lái)我改了流動(dòng)相：125mM檸檬酸（原來(lái)是25mM），125mM磷酸鈉（文獻(xiàn)中寫的是sodium phosphate），100mg/lEDTA，30mg/lSOS，配置好后用磷酸調(diào)節(jié)pH至3.5。我檢測(cè)了只有6-OHDA的樣品，很奇怪，在 4-5分出了一個(gè)峰，11-12分出了一個(gè)峰，4針都是這樣。然后我進(jìn)了添加了6-ohda的腦樣本，之前說(shuō)的大峰倒是沒(méi)有了，但是變成一個(gè)一個(gè)小峰（2-6分之間），而且11-12分的6-OHDA也沒(méi)有出現(xiàn)，還是無(wú)法判斷6-OHDA. 我很迷�，F(xiàn)在，我不知道我應(yīng)該如何改進(jìn)方法。 請(qǐng)各位大俠幫忙 |
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margersy113
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3樓2011-05-31 14:04:04
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