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zqt123_1981木蟲 (小有名氣)
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[交流]
陽性克隆的鑒定問題 已有6人參與
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各位如圖1藍(lán)白斑篩選白斑菌落PCR很正確，然后搖菌提取質(zhì)粒，圖2前10個孔質(zhì)粒PCR，后十個孔質(zhì)粒酶切。圖三 前十個孔質(zhì)粒酶切后十個孔是質(zhì)粒 為啥PCR有目的條帶，酶切卻沒有啊    [ Last edited by zqt123_1981 on 2011-6-2 at 19:45 ] |
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 【分子生物】EPI帖 |
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2樓2011-06-01 22:12:42
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小木蟲(金幣+0.5):給個紅包，謝謝回帖
1949stone(EPI+1): 來也 2011-06-02 14:54:17
小木蟲(金幣+0.5):給個紅包，謝謝回帖
1949stone(EPI+1): 來也 2011-06-02 14:54:17
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PCR驗證是初步篩選，就是看你的目的基因是否已經(jīng)連接到載體上了；包括用劃到平板上的菌當(dāng)模板進(jìn)行PCR，或者用搖的菌液直接當(dāng)模板進(jìn)行PCR，如果能夠擴增出目的片段，就說明你很有可能是連接正確了； 其次確定了這個菌有可能對的話，那么直接提質(zhì)粒，酶切驗證，至于樓主說的載體沒用過，但是你連接之前用什么酶切的，現(xiàn)在重組質(zhì)粒依然用什么酶進(jìn)行切，我有點詫異，樓主難道不知道嗎？ 酶切完之后，點樣，對照就是你當(dāng)初酶切的基因，酶切的載體，然后就是你現(xiàn)在酶切的重組載體，如果大小正確，那么就OK了。。。繼續(xù)下游工作吧！ |
7樓2011-06-02 14:50:10
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