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zqt123_1981木蟲 (小有名氣)
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[交流]
陽性克隆的鑒定問題 已有6人參與
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各位如圖1藍(lán)白斑篩選白斑菌落PCR很正確,然后搖菌提取質(zhì)粒,圖2前10個孔質(zhì)粒PCR,后十個孔質(zhì)粒酶切。圖三 前十個孔質(zhì)粒酶切后十個孔是質(zhì)粒 為啥PCR有目的條帶,酶切卻沒有啊 ![]() ![]() ![]() ![]() [ Last edited by zqt123_1981 on 2011-6-2 at 19:45 ] |
【分子生物】EPI帖 |
專家顧問 (職業(yè)作家)
T.Shen
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專家經(jīng)驗: +57 |
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PCR驗證是初步篩選,就是看你的目的基因是否已經(jīng)連接到載體上了;包括用劃到平板上的菌當(dāng)模板進(jìn)行PCR,或者用搖的菌液直接當(dāng)模板進(jìn)行PCR,如果能夠擴(kuò)增出目的片段,就說明你很有可能是連接正確了; 其次確定了這個菌有可能對的話,那么直接提質(zhì)粒,酶切驗證,至于樓主說的載體沒用過,但是你連接之前用什么酶切的,現(xiàn)在重組質(zhì)粒依然用什么酶進(jìn)行切,我有點(diǎn)詫異,樓主難道不知道嗎? 酶切完之后,點(diǎn)樣,對照就是你當(dāng)初酶切的基因,酶切的載體,然后就是你現(xiàn)在酶切的重組載體,如果大小正確,那么就OK了。。。繼續(xù)下游工作吧! |

金蟲 (正式寫手)

銀蟲 (小有名氣)

銅蟲 (初入文壇)
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