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[求助]
求助PCR老是跑不出條帶
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我跑PCR跑了好幾次，只有一次出過(guò)條帶。試劑都是新買的，加樣也沒(méi)有錯(cuò)。不知哪里出了問(wèn)題。引物用的16s RDNA通用引物5’-TACCTTGTTACGACTT- 3’ 和5’-AGAGTTTGATCATGGC-3，復(fù)性溫度用的40度。（曾做過(guò)42,44,46,48,50的溫度梯度也沒(méi)有條帶）我把那個(gè)唯一出條帶的電泳圖和總DNA也發(fā)上來(lái)了。求高手指點(diǎn)！必謝！還有幾天就畢業(yè)了，還沒(méi)有做完實(shí)驗(yàn)，很著急，求大師指點(diǎn)！ 是不是復(fù)性溫度不夠好？文獻(xiàn)上用的比較長(zhǎng)的F27和R1492引物是57度，我那兩條引物的Tm分別是48和44，因?yàn)樽鎏荻纫矝](méi)出結(jié)果，就自己設(shè)了個(gè)40度。 不知表述清楚沒(méi)有，謝謝了。 [ Last edited by 1949stone on 2011-6-2 at 15:56 ] |
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tianhuijuan
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9樓2011-06-02 18:56:30
2樓2011-06-02 14:02:45
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1949stone(金幣+1): 的確有很多疑問(wèn)啊 2011-06-02 14:55:51
1949stone(金幣+1): 的確有很多疑問(wèn)啊 2011-06-02 14:55:51
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3樓2011-06-02 14:11:19
4樓2011-06-02 14:27:18
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