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30937747木蟲 (小有名氣)
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[求助]
[求助]cDNA的純化方式
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| 請(qǐng)問cDNA有哪些純化方式?除了試劑盒以外的.謝謝 |
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【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★
rainwander(金幣+3): 鼓勵(lì)交流 2011-06-05 23:07:42
rainwander(EPI+1): 2011-06-05 23:07:54
30937747(金幣+3): 我現(xiàn)在就是無法確定cDNA是單鏈，是否也能用無水乙醇和異丙醇沉淀。請(qǐng)問你能確定這樣做可行嗎？ 2011-06-07 07:21:40
rainwander(金幣+3): 鼓勵(lì)交流 2011-06-05 23:07:42
rainwander(EPI+1): 2011-06-05 23:07:54
30937747(金幣+3): 我現(xiàn)在就是無法確定cDNA是單鏈，是否也能用無水乙醇和異丙醇沉淀。請(qǐng)問你能確定這樣做可行嗎？ 2011-06-07 07:21:40
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不知樓主的cDNA是否是蛋白或鹽過多，一般這種情況下，除了使用市面上銷售的純化試劑盒外，最常用的方法就是一些經(jīng)典的方法： 如，如果是混有蛋白，一般是用苯酚氯仿抽提后，在用純的無水乙醇沉淀，最后用75%的乙醇清洗2次，用TE液或去離子水溶解后保存?zhèn)溆谩?br /> 若果是含鹽多的話，就可以省去苯酚抽提那一步，直接先用在用純的無水乙醇沉淀，最后用75%的乙醇清洗2次，用TE液或去離子水溶解后保存?zhèn)溆谩?br /> 主要在離心沉淀后，用水溶解時(shí)，不能只關(guān)心管底的那一小部分，還要記住在離心管的管壁上會(huì)粘很多樣品，否則，你會(huì)損失很大cDNA. Bless you！ |
2樓2011-06-05 22:22:47
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★
rainwander(金幣+2): 鼓勵(lì)交流 2011-06-07 22:39:41
30937747(金幣+3): 不需要充分振蕩混勻嗎?我一般都是振蕩混勻后馬上離心回收 2011-06-08 23:11:26
rainwander(金幣+2): 鼓勵(lì)交流 2011-06-07 22:39:41
30937747(金幣+3): 不需要充分振蕩混勻嗎?我一般都是振蕩混勻后馬上離心回收 2011-06-08 23:11:26
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"我現(xiàn)在就是無法確定cDNA是單鏈，是否也能用無水乙醇和異丙醇沉淀。請(qǐng)問你能確定這樣做可行嗎？" 不知樓主是否做過RNA病毒的提取，我以前提取單鏈RNA病毒的基因組（如，AIV ,APMV,Flavivirus）時(shí)，就是用異丙醇沉淀的，而且就是放在室溫20-30min，就離心回收，一直是這樣做。 |
3樓2011-06-07 21:23:07
4樓2011-06-09 10:26:24
5樓2011-06-09 10:27:29
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