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fengjuanLv銅蟲 (初入文壇)
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[求助]
RT-PCR沒做出來，求指點
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| 我是做棉花纖維的，提取的RNA質(zhì)量還行，OD比值在1.8-2.0左右，RNA跑電泳時只有兩條帶，5s沒有（但實驗室其他人也是只有兩條帶）。反轉(zhuǎn)錄管家基因的時候只有一部分有RT產(chǎn)物，現(xiàn)在找不出原因，請各位盆友指教一下，在哪些方面可能存在問題。（有RT產(chǎn)物的都是天數(shù)很小的幼嫩組織，天數(shù)稍大的都沒有，但是RNA濃度并不比幼嫩組織小，為什么？）本人真的很著急，感謝大家的幫忙！ |
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2樓2011-06-08 08:51:02
fengjuanLv
銅蟲 (初入文壇)
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3樓2011-06-08 10:25:25
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【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★
西瓜(金幣+3): 鼓勵交流 2011-06-08 19:02:53
西瓜(金幣+3): 鼓勵交流 2011-06-08 19:02:53
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從你說的情況來看，RNA應(yīng)該提取的非常成功，但是不能得到你的目的片段的話有以下幾個考慮： 1.你反轉(zhuǎn)錄部分出現(xiàn)問題，導(dǎo)致反轉(zhuǎn)錄出的cDNA不是很完整，或者說效果不好，無法獲得你的目的片段。管家基因并不能說明問題吧，因為一般情況下都很小 2.因為你說幼嫩組織可以獲得管家基因，天數(shù)稍大的都沒有，這說明，很可能你燿的基因只在幼嫩組織中表達，一旦時間過久，就不會有該基因表達。 因此，建議： 1.把你反轉(zhuǎn)錄的cDNA跑個電泳就，看是不是很均勻的一個拖尾，而且這個拖尾有沒有覆蓋到你的目的片段大小 2.再往前取天數(shù)更小的幼嫩組織，看會不會獲得更好的結(jié)果。 好運，歡迎隨時反饋交流 |
5樓2011-06-08 14:33:00
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