houhoujiayou

銀蟲 (小有名氣)

應(yīng)助: 3 (幼兒園)
金幣: 239
帖子: 166
在線: 22.7小時(shí)
蟲號(hào): 968453

[交流] 【求助/交流】做過RT-PCR的請(qǐng)進(jìn)

大家好，我因?yàn)樾陆艙Q課題，要提mRNA做反轉(zhuǎn)錄，因?yàn)閷?shí)驗(yàn)室沒有人做過，不知道試驗(yàn)中應(yīng)該注意什么，還有都要用到什么試劑盒什么酶？請(qǐng)做過的人降一下我也好讓老師早點(diǎn)買試劑盒和酶啊，先謝謝了啊。

回復(fù)此樓

» 猜你喜歡

不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)中的趣事：實(shí)驗(yàn)器材的 “烏龍” 已經(jīng)有0人回復(fù)
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)中的趣事：和實(shí)驗(yàn)材料的 “斗智斗勇” 已經(jīng)有0人回復(fù)
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤(rùn)色/翻譯怎么收費(fèi)? 已經(jīng)有85人回復(fù)
蛋白質(zhì)檢測(cè)：精準(zhǔn)分析，解鎖生物分子的密碼已經(jīng)有0人回復(fù)
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之小鼠實(shí)驗(yàn)：嚴(yán)謹(jǐn)設(shè)計(jì)，解析生命機(jī)制的重要載體已經(jīng)有0人回復(fù)
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之重金屬檢測(cè)：精準(zhǔn)篩查，守護(hù)健康與環(huán)境的防線已經(jīng)有0人回復(fù)
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“蛙測(cè)重金屬我背鍋三千” 已經(jīng)有0人回復(fù)
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI” 已經(jīng)有0人回復(fù)
納米粒度分析已經(jīng)有3人回復(fù)
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標(biāo)南京已經(jīng)有0人回復(fù)

» 本主題相關(guān)商家推薦: (我也要在這里推廣)

» 本主題相關(guān)價(jià)值貼推薦，對(duì)您同樣有幫助:

做過用同源重組進(jìn)行基因敲出的朋友請(qǐng)進(jìn)，PCR做不出來�。� 已經(jīng)有16人回復(fù)
求助！關(guān)于RT-PCR的問題！已經(jīng)有20人回復(fù)
請(qǐng)教RTPCR。。已經(jīng)有4人回復(fù)
RNA濃度好低適合做RT-PCR嗎？已經(jīng)有7人回復(fù)
做RT-PCR的戰(zhàn)友們，內(nèi)標(biāo)定量怎么做？已經(jīng)有18人回復(fù)
RT-PCR相關(guān)問題已經(jīng)有5人回復(fù)
做RT-PCR時(shí)該用哪段氨基酸序列設(shè)計(jì)引物已經(jīng)有6人回復(fù)
ＲＴ－ＰＣＲ問題求助已經(jīng)有18人回復(fù)
【求助/交流】做培養(yǎng)細(xì)胞的RT-PCR，β-actin內(nèi)參出現(xiàn)兩個(gè)條帶，求原因。已經(jīng)有10人回復(fù)
RT-PCR后的cDNA呢？已經(jīng)有17人回復(fù)
誰做過雙鏈RNA的RT-PCR 已經(jīng)有4人回復(fù)

» 搶金幣啦！回帖就可以得到:

查看全部散金貼

1樓 2011-03-14 09:01:37

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

nininini

銀蟲 (小有名氣)

應(yīng)助: 0 (幼兒園)
金幣: 251.9
帖子: 55
在線: 11.5小時(shí)
蟲號(hào): 857393

★ ★
houhoujiayou(金幣+5): 謝謝MM了，但是不是很明白，要DNase消化是為什么��？另外為什么說“只做反轉(zhuǎn)錄”啊，還有其他的操作目的嗎？我是要把酵母的基因反P出來后做表達(dá)的啊，MM做過的話可以說的詳細(xì)點(diǎn)嗎？謝謝了啊 2011-03-14 09:16:09
lstt09nk(金幣+2): 鼓勵(lì)交流 2011-03-14 09:26:11

如果是只做反轉(zhuǎn)錄的話只需要提取RNA、DNase消化和反轉(zhuǎn)錄酶了，根據(jù)實(shí)驗(yàn)室情況RNA提取可以用試劑盒也可以用其它試劑提取，DNase和反轉(zhuǎn)錄酶也都差不多了，找平時(shí)經(jīng)常使用試劑的廠家應(yīng)該問題不大了吧，天根、生工什么的應(yīng)該都沒問題吧

贊一下(1人)

回復(fù)此樓

2樓2011-03-14 09:08:21

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

weishengsu5

木蟲 (正式寫手)

應(yīng)助: 1 (幼兒園)
金幣: 2526
帖子: 469
在線: 374.2小時(shí)
蟲號(hào): 1016558

houhoujiayou(金幣+3): 這個(gè)我聽說過了，說要用什么溶液把所有要用的儀器泡一下，那基本上要買什么試劑盒和酶啊，能把操作步驟詳細(xì)講一下嘛？雖然看過理論，可是實(shí)際做起來還是無從下手，咳 2011-03-14 09:25:30

引用回帖:

Originally posted by houhoujiayou at 2011-03-14 09:01:37:
大家好，我因?yàn)樾陆艙Q課題，要提mRNA做反轉(zhuǎn)錄，因?yàn)閷?shí)驗(yàn)室沒有人做過，不知道試驗(yàn)中應(yīng)該注意什么，還有都要用到什么試劑盒什么酶？請(qǐng)做過的人降一下我也好讓老師早點(diǎn)買試劑盒和酶啊，先謝謝了啊。

在提取mRNA中注意他是很容易降解的，自然環(huán)境中都存在著核酸酶，所以提取過程中注意下

贊一下

回復(fù)此樓

3樓2011-03-14 09:17:55

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

weishengsu5

木蟲 (正式寫手)

應(yīng)助: 1 (幼兒園)
金幣: 2526
帖子: 469
在線: 374.2小時(shí)
蟲號(hào): 1016558

引用回帖:

Originally posted by nininini at 2011-03-14 09:08:21:
如果是只做反轉(zhuǎn)錄的話只需要提取RNA、DNase消化和反轉(zhuǎn)錄酶了，根據(jù)實(shí)驗(yàn)室情況RNA提取可以用試劑盒也可以用其它試劑提取，DNase和反轉(zhuǎn)錄酶也都差不多了，找平時(shí)經(jīng)常使用試劑的廠家應(yīng)該問題不大了吧，天根、生工什么 ...

你是研究什么代謝的，我們課題組也是代謝方向的

贊一下

回復(fù)此樓

4樓2011-03-14 09:22:28

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

houhoujiayou

銀蟲 (小有名氣)

應(yīng)助: 3 (幼兒園)
金幣: 239
帖子: 166
在線: 22.7小時(shí)
蟲號(hào): 968453

引用回帖:

Originally posted by weishengsu5 at 2011-03-14 09:22:28:
你是研究什么代謝的，我們課題組也是代謝方向的

我是做一個(gè)基因的克隆表達(dá)，之前的課題做不出來，臨時(shí)換了一個(gè)，具體怎么操作我都不明白，急啊

贊一下

回復(fù)此樓

5樓2011-03-14 09:27:22

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

jiangzhiang

鐵桿木蟲 (正式寫手)

應(yīng)助: 0 (幼兒園)
金幣: 11012.1
帖子: 743
在線: 169.8小時(shí)
蟲號(hào): 927289

houhoujiayou(金幣+1): 嗯哪，謝謝了啊，我再看看操作書吧 2011-03-14 10:05:35
houhoujiayou(金幣+1): 2011-03-16 12:01:17

還是沒明白，是從來沒接觸過，還是試驗(yàn)遇到困難，實(shí)在不知道怎么辦先看看分子克隆手冊(cè)，或者別人的論文，熟悉下流程，需要什么試劑好說吧，我覺得MBI和TAKALA的不錯(cuò)

贊一下

回復(fù)此樓

6樓2011-03-14 09:51:19

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

zhaoxianfeng

金蟲 (初入文壇)

應(yīng)助: 0 (幼兒園)
金幣: 767.7
帖子: 28
在線: 11.1小時(shí)
蟲號(hào): 1130059

★
silicare(金幣+1): 謝謝參與 2011-03-14 11:50:57
houhoujiayou(金幣+1): 2011-03-16 12:01:22

引用回帖:

1.提RNA，防降解
2.rt，反轉(zhuǎn)RNA得出cDNA
3.用cDNA做模板進(jìn)行PCR，我們用寶生物的試劑盒做的
4.1%電泳檢測(cè)，照相。

贊一下(1人)

回復(fù)此樓

7樓2011-03-14 10:37:22

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

zhangxn2010

木蟲 (著名寫手)

MolEPI: 1
應(yīng)助: 14 (小學(xué)生)
金幣: 2450.9
帖子: 2880
在線: 284小時(shí)
蟲號(hào): 972619

houhoujiayou(金幣+1): 2011-03-16 12:01:25

這個(gè)先得把分子克隆實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)看一遍(相關(guān)方面），那樣會(huì)比較全面，如果實(shí)驗(yàn)中遇到問題，來這里求助會(huì)比較好，祝實(shí)驗(yàn)順利！

贊一下

回復(fù)此樓

8樓2011-03-14 11:35:14

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

沒有眼淚

銅蟲 (初入文壇)

應(yīng)助: 0 (幼兒園)
金幣: 96.2
帖子: 38
在線: 11.2小時(shí)
蟲號(hào): 1108570

houhoujiayou(金幣+1): 2011-03-16 12:01:28

1.提取總RNA，跑膠看一下質(zhì)量
2.RT-PCR，一般用Olig-dT轉(zhuǎn)錄出cDNA（我們用的是東洋舫的盒子）
再進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)

贊一下

回復(fù)此樓

9樓2011-03-14 14:39:41

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

tingspdf

至尊木蟲 (著名寫手)

應(yīng)助: 6 (幼兒園)
金幣: 11292.8
帖子: 2033
在線: 1241.2小時(shí)
蟲號(hào): 875792

houhoujiayou(金幣+1): 2011-03-16 12:01:32

看分子克隆吧，那上面是最全的

贊一下

回復(fù)此樓

10樓2011-03-14 16:00:41

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

nininini

銀蟲 (小有名氣)

應(yīng)助: 0 (幼兒園)
金幣: 251.9
帖子: 55
在線: 11.5小時(shí)
蟲號(hào): 857393

引用回帖:

Originally posted by weishengsu5 at 2011-03-14 09:22:28:
你是研究什么代謝的，我們課題組也是代謝方向的

我們也差不多啦~

贊一下

回復(fù)此樓

11樓2011-03-15 17:28:39

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

nininini

銀蟲 (小有名氣)

應(yīng)助: 0 (幼兒園)
金幣: 251.9
帖子: 55
在線: 11.5小時(shí)
蟲號(hào): 857393

houhoujiayou(金幣+1): 謝謝 2011-03-22 20:57:24

引用回帖:

DNase的目的是進(jìn)一步消化未完全除盡的DNA，如果只是表達(dá)的話不用定量之類的相對(duì)要求低一點(diǎn)兒，只要能P出產(chǎn)物就好了~

贊一下

回復(fù)此樓

12樓2011-03-15 17:31:53

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

mxlo.o

金蟲 (正式寫手)

應(yīng)助: 2 (幼兒園)
金幣: 1302
帖子: 370
在線: 342.8小時(shí)
蟲號(hào): 1167640

★
小木蟲(金幣+0.5):給個(gè)紅包，謝謝回帖

引用回帖:

9樓: Originally posted by 沒有眼淚 at 2011-03-14 14:39:41:
1.提取總RNA，跑膠看一下質(zhì)量
2.RT-PCR，一般用Olig-dT轉(zhuǎn)錄出cDNA（我們用的是東洋舫的盒子）
再進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)

我用一種真菌提取出RNA后進(jìn)行了反轉(zhuǎn)錄，其中1kb左右的片段提取出來了，但是2kb左右的片段怎么也擴(kuò)增不出來。我的問題是1kb的能擴(kuò)出來是否證明我提取的RNA沒有問題，如果這樣的話，哪2kb的為什么擴(kuò)增不出來？

贊一下(1人)

回復(fù)此樓

13樓2011-12-09 22:19:44

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

最具人氣熱帖推薦 [查看全部]	作者	回/看	最后發(fā)表

[考研] 286求調(diào)劑 +6	lemonzzn 2026-03-16	9/450	2026-03-18 15:31 by vgtyfty
[考研] 085601專碩，總分342求調(diào)劑，地區(qū)不限 +5	share_joy 2026-03-16	5/250	2026-03-18 14:48 by haxia
[考研] 化工學(xué)碩306求調(diào)劑 +10	42838695 2026-03-12	10/500	2026-03-18 14:42 by haxia
[考研] 311求調(diào)劑 +11	冬十三 2026-03-15	12/600	2026-03-18 14:36 by 星空星月
[考研] 298-一志愿中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)-求調(diào)劑 +7	手機(jī)用戶 2026-03-17	7/350	2026-03-18 14:34 by vgtyfty
[考研] 能源材料化學(xué)課題組招收碩士研究生8-10名 +4	脫穎而出 2026-03-16	9/450	2026-03-18 14:13 by 脫穎而出
[考研] 一志愿985，本科211，0817化學(xué)工程與技術(shù)319求調(diào)劑 +6	Liwangman 2026-03-15	6/300	2026-03-18 13:21 by 盡舜堯1
[考研] 312求調(diào)劑 +8	陌宸希 2026-03-16	9/450	2026-03-18 12:39 by Linda Hu
[考研] 285化工學(xué)碩求調(diào)劑（081700） +9	柴郡貓_ 2026-03-12	9/450	2026-03-17 10:18 by Sammy2
[考研] 11408 一志愿西電，277分求調(diào)劑 +3	zhouzhen654 2026-03-16	3/150	2026-03-17 07:03 by laoshidan
[考研] 326求調(diào)劑 +4	諾貝爾化學(xué)獎(jiǎng)覬?/a> 2026-03-15	7/350	2026-03-16 17:11 by 諾貝爾化學(xué)獎(jiǎng)覬?/a>
[考研] 0703一志愿211 285分求調(diào)劑 +5	ly3471z 2026-03-13	5/250	2026-03-16 16:16 by 哦哦123
[考研] 277材料科學(xué)與工程080500求調(diào)劑 +3	自由煎餅果子 2026-03-16	3/150	2026-03-16 14:10 by 運(yùn)氣yunqi
[考研] 中科大材料與化工319求調(diào)劑 +3	孟鑫材料 2026-03-14	3/150	2026-03-14 20:10 by ms629
[考研] 289求調(diào)劑 +4	這么名字咋樣 2026-03-14	6/300	2026-03-14 18:58 by userper
[考研] 招收0805（材料）調(diào)劑 +3	18595523086 2026-03-13	3/150	2026-03-14 00:33 by 123%、
[考研] 304求調(diào)劑 +6	Mochaaaa 2026-03-12	7/350	2026-03-13 22:18 by 星空星月
[考研] 304求調(diào)劑 +7	7712b 2026-03-13	7/350	2026-03-13 21:42 by peike
[考研] 工科材料085601 279求調(diào)劑 +8	困于星晨 2026-03-12	10/500	2026-03-13 15:42 by ms629
[考研] 289求調(diào)劑 +3	李政瑩 2026-03-12	3/150	2026-03-13 11:02 by 求調(diào)劑zz