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houhoujiayou

銀蟲(chóng) (小有名氣)

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[交流] 【求助/交流】做過(guò)RT-PCR的請(qǐng)進(jìn)

大家好，我因?yàn)樾陆艙Q課題，要提mRNA做反轉(zhuǎn)錄，因?yàn)閷?shí)驗(yàn)室沒(méi)有人做過(guò)，不知道試驗(yàn)中應(yīng)該注意什么，還有都要用到什么試劑盒什么酶？請(qǐng)做過(guò)的人降一下我也好讓老師早點(diǎn)買試劑盒和酶啊，先謝謝了啊。

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1樓 2011-03-14 09:01:37

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weishengsu5

木蟲(chóng) (正式寫手)

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houhoujiayou(金幣+3): 這個(gè)我聽(tīng)說(shuō)過(guò)了，說(shuō)要用什么溶液把所有要用的儀器泡一下，那基本上要買什么試劑盒和酶啊，能把操作步驟詳細(xì)講一下嘛？雖然看過(guò)理論，可是實(shí)際做起來(lái)還是無(wú)從下手，咳 2011-03-14 09:25:30

引用回帖:

Originally posted by houhoujiayou at 2011-03-14 09:01:37:
大家好，我因?yàn)樾陆艙Q課題，要提mRNA做反轉(zhuǎn)錄，因?yàn)閷?shí)驗(yàn)室沒(méi)有人做過(guò)，不知道試驗(yàn)中應(yīng)該注意什么，還有都要用到什么試劑盒什么酶？請(qǐng)做過(guò)的人降一下我也好讓老師早點(diǎn)買試劑盒和酶啊，先謝謝了啊。

在提取mRNA中注意他是很容易降解的，自然環(huán)境中都存在著核酸酶，所以提取過(guò)程中注意下

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3樓2011-03-14 09:17:55

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nininini

銀蟲(chóng) (小有名氣)

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★ ★
houhoujiayou(金幣+5): 謝謝MM了，但是不是很明白，要DNase消化是為什么��？另外為什么說(shuō)“只做反轉(zhuǎn)錄”啊，還有其他的操作目的嗎？我是要把酵母的基因反P出來(lái)后做表達(dá)的啊，MM做過(guò)的話可以說(shuō)的詳細(xì)點(diǎn)嗎？謝謝了啊 2011-03-14 09:16:09
lstt09nk(金幣+2): 鼓勵(lì)交流 2011-03-14 09:26:11

如果是只做反轉(zhuǎn)錄的話只需要提取RNA、DNase消化和反轉(zhuǎn)錄酶了，根據(jù)實(shí)驗(yàn)室情況RNA提取可以用試劑盒也可以用其它試劑提取，DNase和反轉(zhuǎn)錄酶也都差不多了，找平時(shí)經(jīng)常使用試劑的廠家應(yīng)該問(wèn)題不大了吧，天根、生工什么的應(yīng)該都沒(méi)問(wèn)題吧

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2樓2011-03-14 09:08:21

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weishengsu5

木蟲(chóng) (正式寫手)

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引用回帖:

Originally posted by nininini at 2011-03-14 09:08:21:
如果是只做反轉(zhuǎn)錄的話只需要提取RNA、DNase消化和反轉(zhuǎn)錄酶了，根據(jù)實(shí)驗(yàn)室情況RNA提取可以用試劑盒也可以用其它試劑提取，DNase和反轉(zhuǎn)錄酶也都差不多了，找平時(shí)經(jīng)常使用試劑的廠家應(yīng)該問(wèn)題不大了吧，天根、生工什么 ...

你是研究什么代謝的，我們課題組也是代謝方向的

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4樓2011-03-14 09:22:28

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houhoujiayou

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引用回帖:

Originally posted by weishengsu5 at 2011-03-14 09:22:28:
你是研究什么代謝的，我們課題組也是代謝方向的

我是做一個(gè)基因的克隆表達(dá)，之前的課題做不出來(lái)，臨時(shí)換了一個(gè)，具體怎么操作我都不明白，急啊

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5樓2011-03-14 09:27:22

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