 |
 |
 |
| 24小時(shí)熱門(mén)版塊排行榜 |
- >論壇更新日志 (6400)
- >導(dǎo)師招生 (1436)
- >考研 (1348)
- >文獻(xiàn)求助 (526)
- >蟲(chóng)友互識(shí) (315)
- >考博 (217)
- >休閑灌水 (199)
- >基金申請(qǐng) (192)
- >碩博家園 (156)
- >招聘信息布告欄 (127)
- >博后之家 (99)
- >論文投稿 (52)
- >綠色求助(高懸賞) (51)
- >找工作 (43)
- >SciFinder/Reaxys (32)
- >外文書(shū)籍求助 (20)
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 3 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 439 | 回復(fù): 2 | ||||
p120933799金蟲(chóng) (小有名氣)
|
[求助]
DNA溶解小問(wèn)
|
| 我用CTAB方法提取真菌DNA，基本上是嚴(yán)格按照操作，可最后加TE后總有不溶解透明物質(zhì)，在65℃下也不溶解，請(qǐng)問(wèn)為何？如何可避免，以往也遇到很多這種情況， |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
384求調(diào)劑
已經(jīng)有6人回復(fù)
-
生物學(xué)學(xué)碩求調(diào)劑
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
081700 調(diào)劑 267分
已經(jīng)有6人回復(fù)
-
一志愿河北工業(yè)大學(xué)0817化工278分求調(diào)劑
已經(jīng)有8人回復(fù)
-
269求調(diào)劑
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
一志愿211 初試270分 求調(diào)劑
已經(jīng)有5人回復(fù)
-
265求調(diào)劑
已經(jīng)有10人回復(fù)
-
327求調(diào)劑
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
材料專(zhuān)業(yè)求調(diào)劑
已經(jīng)有9人回復(fù)
-
291求調(diào)劑
已經(jīng)有7人回復(fù)
» 本主題相關(guān)價(jià)值貼推薦，對(duì)您同樣有幫助:
- 放線菌基因組DNA提取后，用TE不溶�。�？
已經(jīng)有20人回復(fù)
- ddH2O中的DNA怎么這么難以溶解？
已經(jīng)有11人回復(fù)
- 【求助/交流】DNA沉淀怎么溶解？用什么溶解可以比較長(zhǎng)時(shí)間保存？
已經(jīng)有4人回復(fù)
- 【求助/交流】買(mǎi)來(lái)的RNA和DNA純品用什么溶劑可以完全溶解？
已經(jīng)有5人回復(fù)
- 【求助/交流】請(qǐng)問(wèn)溶解DNA時(shí)用什么緩沖溶液
已經(jīng)有8人回復(fù)
- 【求助/交流】DNA融解溫度的問(wèn)題
已經(jīng)有6人回復(fù)
- 【求助/交流】DNA用水可以溶解嗎？
已經(jīng)有34人回復(fù)
- 【求助/交流】求助：DNA的溶解
已經(jīng)有7人回復(fù)
beautybanana
木蟲(chóng) (著名寫(xiě)手)
- MicEPI: 1
- 應(yīng)助: 23 (小學(xué)生)
- 貴賓: 0.02
- 金幣: 2973.8
- 散金: 5088
- 紅花: 26
- 帖子: 1694
- 在線: 485.8小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 1142157
- 注冊(cè): 2010-11-09
- 性別: GG
- 專(zhuān)業(yè): 納米生物學(xué)
【答案】應(yīng)助回帖
p120933799(金幣+5): 謝謝，很詳細(xì)啊 2011-06-14 08:41:41
|
采用冷凍研磨CTAB法提取樣品基因組DNA。 （1）從斜面培養(yǎng)基中接入一定量的孢子至液體種子培養(yǎng)基中180rpm，28℃培養(yǎng)2天，用7mL的離心管離心收集菌體，用無(wú)菌水洗滌后充分晾干至-70℃冰箱保存。 （2）取0.5g干燥的菌絲體放入研缽中，用液氮磨碎至粉狀，轉(zhuǎn)移至7mLeppendorf離心管中。 （3）加入2mL 65℃預(yù)熱的2×CTAB 抽提液，顛倒混勻，65℃保溫30min，每隔數(shù)分鐘溫和混勻一次。 （4）加入2mL的氯仿/異戊醇（24：1），輕緩顛倒混勻，室溫靜置5～10min ，10000rpm離心5min。 （5）取上清約2mL轉(zhuǎn)至另一干凈的eppendorf離心管中（注意不要吸出有機(jī)相），加入200uL 65℃預(yù)熱的CTAB/ NaCl 溶液，輕緩顛倒混勻。 （6）加入等體積的氯仿/異戊醇（24：1）抽提液，混勻，10000rpm離心5min。 （7）取上清700uL至另一干凈的eppendorf離心管中（注意不要吸出有機(jī)相），加入等體積的 CTAB沉淀液，顛倒混勻，65℃保溫30min。 （8）4℃，5000rpm離心5min。 （9）倒去上清，用濾紙吸干殘液，加入500uL 高鹽TE緩沖液重懸沉淀，65℃保溫30min，直至完全溶解。 （10）加入300 uL的異丙醇沉淀核酸，充分混勻，4℃，10000rpm離心15min。 （11）倒去上清，用80%乙醇洗滌沉淀，用濾紙吸干殘液，在超凈工作臺(tái)中室溫下自然干燥。 （12）加入100uL含RNA酶的TE緩沖液重懸，42℃水浴30min。 以0.7%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)基因組DNA大小及提取質(zhì)量；紫外分光光度計(jì)法檢測(cè)DNA純度（將DNA稀釋100倍后分別測(cè)OD260和OD280，并計(jì)算OD260/ OD280的比值） 這是我做的步驟，溶解不了是不是最后搞的太干了~這種情況應(yīng)該是很少的~ |
2樓2011-06-13 19:20:52
冼亮淀粉酶
專(zhuān)家顧問(wèn) (知名作家)
生物大分子降解酶
-
專(zhuān)家經(jīng)驗(yàn): +248 - MicEPI: 114
- 應(yīng)助: 257 (大學(xué)生)
- 貴賓: 0.272
- 金幣: 19461.4
- 散金: 1704
- 紅花: 121
- 帖子: 6587
- 在線: 2777.7小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 856414
- 注冊(cè): 2009-09-25
- 性別: GG
- 專(zhuān)業(yè): 環(huán)境微生物學(xué)
- 管轄: 微生物
|
CTAB法太繁瑣了，看我的 2.4.14.1真菌總DNA的提取 （1）接種菌株至液體培養(yǎng)基中，28℃，180rpm振蕩培養(yǎng)3天； （2）用滅菌紗布過(guò)濾，并壓干菌體； （3）將菌絲體倒入研缽（滅菌并預(yù)冷），迅速倒入液氮，研磨至粉末狀； （4）將粉末移至1.5mL的EP管中，加入600µL真菌提取液； （5）加等體積苯酚/氯仿，輕輕倒轉(zhuǎn)混合，10000rpm離心10min； （6）取400µL上清液移入新的1.5mlLEP管，重復(fù)步驟（5）； （7）取上清液，加入兩倍體積無(wú)水乙醇，-20℃放置30min； （8）10000rpm 離心10min，75%乙醇洗沉淀2次，真空干燥； （9）以20µL 1×TE 溶解沉淀； （10）電泳檢測(cè)總DNA的濃度。 （5）DNA抽提液的配置 表 2.5 DNA抽提液的配置 成分 濃度 NaCl 200mmol/L EDTA-Na2 4mmol/L SDS 2% Tris-HCl(pH=8.0) 100mmol/L |
3樓2011-06-14 21:33:42
相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 p120933799 的主題更新
| 3 | 1/1 | 返回列表 |
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 一志愿南航材料專(zhuān)317分求調(diào)劑 +3 | 炸呀炸呀炸薯?xiàng)l 2026-03-23 | 3/150 |
|
|---|---|---|---|---|
|
|
[考研] 306求0703調(diào)劑一志愿華中師范 +6 | 紙魚(yú)ly 2026-03-21 | 7/350 |
|
|
[考研] 336化工調(diào)劑 +4 | 王大坦1 2026-03-23 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 工科0856求調(diào)劑 +5 | 沐析汀汀 2026-03-21 | 5/250 |
|
|
|
[考研]
 材料與化工考研調(diào)劑
+4
|
孅華 2026-03-22 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 0854電子信息求調(diào)劑 324 +3 | Promise-jyl 2026-03-23 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 333求調(diào)劑 +6 | 87639 2026-03-21 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 276求調(diào)劑 +3 | YNRYG 2026-03-21 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 一志愿西安交通大學(xué)材料工程專(zhuān)業(yè) 282分求調(diào)劑 +11 | 楓橋ZL 2026-03-18 | 13/650 |
|
|
|
[考研] 311求調(diào)劑 +6 | 冬十三 2026-03-18 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 307求調(diào)劑 +11 | 冷笙123 2026-03-17 | 11/550 |
|
|
|
[考研] 初試 317 +7 | 半拉月丙 2026-03-20 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 求助 +5 | 夢(mèng)里的無(wú)言 2026-03-21 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 313求調(diào)劑 +4 | 肆叁貳壹22 2026-03-19 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 一志愿重慶大學(xué)085700資源與環(huán)境總分308求調(diào)劑 +7 | 墨墨漠 2026-03-20 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 332求調(diào)劑 +4 | ydfyh 2026-03-17 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 317求調(diào)劑 +5 | 申子申申 2026-03-19 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑，一志愿:南京航空航天大學(xué)大學(xué) ，080500材料科學(xué)與工程學(xué)碩，總分289分 +4 | @taotao 2026-03-19 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 086500 325 求調(diào)劑 +3 | 領(lǐng)帶小熊 2026-03-19 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 廣西大學(xué)家禽遺傳育種課題組2026年碩士招生（接收計(jì)算機(jī)專(zhuān)業(yè)調(diào)劑） +3 | 123阿標(biāo) 2026-03-17 | 3/150 |
|