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炒飯大王銅蟲 (小有名氣)
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[求助]
親和層析blue sepharose 6 Fast Flow 純化羰基還原酶的問題
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以20mM 6.5 磷酸鹽緩沖液平衡， 樣品上樣后，平衡液淋洗， 以5mM NAD+（溶于20mM 6.5 磷酸鹽緩沖液）洗脫，出現(xiàn)一個(gè)很巨大的峰，但是其中沒有酶活，也就是沒有結(jié)合目的蛋白，而上樣淋洗液里有酶活。 現(xiàn)在的問題是為什么會(huì)不結(jié)合，目的蛋白是與輔酶一結(jié)合的，檢測(cè)酶活也是利用輔酶一的減少來(lái)進(jìn)行的。 是pH的問題？pH對(duì)親和的影響大么， 是上樣量的問題？ 大家看呢 |
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