 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 5 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 4929 | 回復(fù): 19 | |||
| 本帖產(chǎn)生 1 個 MicEPI ，點擊這里進(jìn)行查看 | |||
| 當(dāng)前只顯示滿足指定條件的回帖，點擊這里查看本話題的所有回帖 | |||
Juliana芷蕊金蟲 (小有名氣)
|
[求助]
紫外分光光度法測的吸光值怎么轉(zhuǎn)化為酶反應(yīng)初速度呢？
|
||
|
如題，我是用紫外光度法中的動力學(xué)測木素過氧化物酶（Lip）的酶活， （測定方法： 取0.6 mL待測酶液，同時加入0.6 mL的10 mmol/L藜蘆醇溶液，1.8 mL的酒石酸緩沖液（pH=3.0） 250 mmol/L，用0.03 mL，40 mmol/L的H2O2啟動反應(yīng)，總體積3.0 mL，25 ℃反應(yīng)3 min，在310 nm（ε310=9300 mol-1cm-1）波長下測定吸光度的變化。同反應(yīng)體系做空白樣為不加入H2O2啟動反應(yīng)。一個酶活力單位（U）定義為每分鐘氧化藜蘆醇產(chǎn)生1 μmol藜蘆醛所需的酶量。） 問題是我測的曲線吸光度變化不大，而且各段的斜率不一，這樣在計算酶活時選線性部分我就很困惑，不知道怎么選點比較好，平行樣之間的平行性也不好，還有就是通過吸光度變化怎么轉(zhuǎn)化成反應(yīng)初速度呢？我做的是酶催化動力學(xué)，做動力學(xué)對條件要求是不是很苛刻呢？現(xiàn)在瀕臨崩潰，忠心希望各位師長能給些提點，小妹不勝感激。 |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
壓國家一區(qū)線，求導(dǎo)師收留，有恩必謝！
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
081200-314
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
289求調(diào)劑
已經(jīng)有9人回復(fù)
-
085405 考的11408求各位老師帶走
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
339求調(diào)劑
已經(jīng)有6人回復(fù)
-
材料與化工272求調(diào)劑
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
085701環(huán)境工程，267求調(diào)劑
已經(jīng)有15人回復(fù)
-
材料求調(diào)劑一志愿哈工大324
已經(jīng)有9人回復(fù)
-
292求調(diào)劑
已經(jīng)有15人回復(fù)
-
304求調(diào)劑
已經(jīng)有5人回復(fù)
» 本主題相關(guān)價值貼推薦，對您同樣有幫助:
- 在線等,用紫外分光光度計測吸光度的問題
已經(jīng)有23人回復(fù)
- 不同的紫外分光光度計是不是測出的吸收值不一樣？
已經(jīng)有11人回復(fù)
- 小分子蛋白測紫外吸光值
已經(jīng)有8人回復(fù)
- 紫外分光光度法測蛋白酶活
已經(jīng)有19人回復(fù)
- 過硫酸鉀氧化-紫外分光光度法測總氮 吸光度高的很
已經(jīng)有7人回復(fù)
- 【求助】用碘-碘化鉀溶液比色法，使用紫外可見分光光度計測定吸光度
已經(jīng)有5人回復(fù)
- 【求助】紫外分光光度法測硝酸鹽氮的問題，吸光度全是負(fù)，負(fù)的情況下也能達(dá)到3個9。
已經(jīng)有23人回復(fù)
- 【求助/交流】細(xì)菌中酶活的測定用紫外可見分光光度法怎么測？
已經(jīng)有4人回復(fù)
- 【求助】為什么紫外測氨氮時空白樣的吸光度值大于含氨氮的樣品
已經(jīng)有16人回復(fù)
- 【討論】堿性過硫酸鉀消解紫外分光光度法測定水樣中總氮
已經(jīng)有43人回復(fù)
- 【求助】關(guān)于DNS測定還原糖，進(jìn)行測吸光值的問題，請教高人指教，非誠勿擾！
已經(jīng)有9人回復(fù)
zhang8826857: 編輯內(nèi)容 2012-08-10 16:41
 [ Last edited by zhang8826857 on 2012-8-10 at 16:41 ] |
9樓2012-08-10 16:36:30
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★ ★
wolfebst(金幣+5, EPI+1): 鼓勵一下 2011-06-16 23:13:45
Juliana芷蕊(金幣+3): 我主要想問的是紫外分光光度法測的吸光值怎么轉(zhuǎn)化為酶（Lip）反應(yīng)初速度，主要想知道轉(zhuǎn)化公式呢，還是謝謝你呢 2011-06-17 08:49:35
wolfebst(金幣+5, EPI+1): 鼓勵一下 2011-06-16 23:13:45
Juliana芷蕊(金幣+3): 我主要想問的是紫外分光光度法測的吸光值怎么轉(zhuǎn)化為酶（Lip）反應(yīng)初速度，主要想知道轉(zhuǎn)化公式呢，還是謝謝你呢 2011-06-17 08:49:35
|
你得先確認(rèn)你的酶有沒有活性 如果有活性的話，理論上是可以測定酶活的 1.動力學(xué)的測量數(shù)據(jù)好壞取決于你的底物濃度和酶的濃度，酶多了反應(yīng)太快來不及檢測。應(yīng)該將酶液稀釋，蛋白量可以用BRADFORD法測定，就我感覺600微升的酶液量挺大的了~ 2.測量的線性范圍至少應(yīng)該是2min,結(jié)果才會比較可信。取得時候都是取初始的一段時間，要保證反應(yīng)速率恒定 |
2樓2011-06-16 23:01:05
【答案】應(yīng)助回帖
Juliana芷蕊(金幣+3): 我主要是想將用紫外測的吸光度變化轉(zhuǎn)化成酶反應(yīng)初速度呢？前輩知道這方面的書籍嗎？給推薦一下吧，不勝感激呢！有轉(zhuǎn)化公式更好了，我做的是Lip酶呢 2011-06-17 16:33:43
|
....這個問題很多書上都有的，基本來說，都是根據(jù)朗伯-比爾定律來計算的 I=εbc 其中I是吸光度，εbc 分別是：物質(zhì)的吸光系數(shù)，光程，物質(zhì)的量濃度，根據(jù)公式算出物質(zhì)的量濃度變化，乘以反應(yīng)體積，就是反應(yīng)的物質(zhì)的量，處于體系中的蛋白量，得到比酶活，做不同底物濃度下的比酶活，取雙倒數(shù)，應(yīng)該是接近線性的~再利用米氏方程的倒數(shù)形式求的Km就可以了 |
3樓2011-06-17 09:02:41
4樓2011-06-17 16:41:51
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 339求調(diào)劑 +5 | 烤麥芽 2026-03-27 | 6/300 |
|
|---|---|---|---|---|
|
|
[考研] 085701環(huán)境工程，267求調(diào)劑 +15 | minht 2026-03-26 | 15/750 |
|
|
[考研] 085600 286分 材料求調(diào)劑 +5 | 麻辣魷魚 2026-03-27 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 295求調(diào)劑 +5 | 1428151015 2026-03-27 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 265求調(diào)劑 +8 | 小木蟲085600 2026-03-27 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 085602 307分 求調(diào)劑 +6 | 不知道叫什么！ 2026-03-26 | 6/300 |
|
|
|
[考博] 26申博 +3 | 加油沖啊！ 2026-03-26 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 269專碩求調(diào)劑 +10 | 金恩貝 2026-03-21 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 279 分 求調(diào)劑 +4 | 睡個好覺_16 2026-03-24 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑 +6 | 林之夕 2026-03-24 | 6/300 |
|
|
|
[考研]
 304材料求調(diào)劑
+4
|
鐘llll 2026-03-26 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 材料277求調(diào)劑 +5 | min3 2026-03-24 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 生物技術(shù)與工程 +3 | 1294608413 2026-03-25 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 0854電子信息求調(diào)劑 +7 | α____ 2026-03-22 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 080500求調(diào)劑 +3 | zzzzfan 2026-03-24 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 341求調(diào)劑(一志愿湖南大學(xué)070300) +5 | 番茄頭--- 2026-03-22 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 284求調(diào)劑 +3 | yanzhixue111 2026-03-23 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 求老師收我 +3 | zzh16938784 2026-03-23 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 一志愿深大，0703化學(xué)，總分302，求調(diào)劑 +4 | 七月-七七 2026-03-21 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑 +3 | .m.. 2026-03-21 | 4/200 |
|