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ybQuan金蟲 (著名寫手)
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[交流]
關(guān)于DNA提取的問題 已有6人參與
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在提取昆蟲DNA的時候，裂解液中加入一定的蛋白酶K，消化結(jié)束后加入醋酸甲沉淀雜質(zhì)，然后用異丙醇沉淀DNA 我像我問的是：消化完后蛋白酶K要不要處理一下？有沒有必要？ 百度里有人說要95°滅火15min，蛋白酶K對DNA質(zhì)量有什么影響?如果95°滅火，那做PCR的時候預(yù)變性時候不是就可以了嗎？ |
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yuxia82012
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2樓2011-06-21 17:48:39
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我們是用PCR儀當(dāng)水浴鍋而已……95度滅活是你提取DNA的最后一步，滅活之后的DNA可以存起來也可以直接進行后續(xù)的PCR實驗。 我們做的是線蟲，蛋白酶K處理之后再滅活蛋白酶，就可以直接作為PCR模板了，跟你們的材料不一樣，方法也不一樣。 我們沉淀DNA的方法跟你的差不多，只不過沒用在這里。樣品量大的話，可以用苯酚氯仿抽提。不過方法是越簡單越好，你可以按原方法提取之后進行PCR，如果有問題，再加一步95度15分鐘滅活蛋白酶K就好了，之后再進行PCR。 不要把滅活這步當(dāng)成預(yù)變性直接PCR，首先蛋白酶K沒滅活之前會降解Taq酶，其次95度15分鐘的條件對Taq酶的活性破壞也很大。 |
6樓2011-06-22 15:17:12
ybQuan
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7樓2011-06-23 10:13:02
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8樓2011-06-23 15:52:17
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10樓2011-10-17 20:33:38
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