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小新3858木蟲 (正式寫手)
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[求助]
為什么考馬斯亮藍(lán)染色能看到我要的條帶，weston卻看不到呢？
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| RT，我每次做電泳都是做兩塊，一塊考馬斯亮藍(lán)染色，一塊做weston，每次都是考染有條帶，weston卻看不到，，我做weston做的不多，大俠們幫忙分析一下原因 |
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【答案】應(yīng)助回帖
★ ★
lstt09nk(金幣+2): 很熱心 2011-06-22 17:23:24
lstt09nk(金幣+2): 很熱心 2011-06-22 17:23:24
考染沒問(wèn)題只能說(shuō)明跑膠的步驟應(yīng)該是沒問(wèn)題的，但western（樓主拼錯(cuò)啦 ）做不出來(lái)就有很多可能了：轉(zhuǎn)膜步驟：濾紙、膠、膜順序有沒有放錯(cuò)？ 氣泡有沒有趕干凈？ 電極有沒有插反？ 電轉(zhuǎn)液有沒有配錯(cuò)？ 免疫反應(yīng)：抗體有沒有問(wèn)題？確定可以和你的目的蛋白結(jié)合么？ 顯色液有沒有配錯(cuò)��？ 可能存在的問(wèn)題要樓主小心求證了。 |
4樓2011-06-22 10:16:29
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小新3858(金幣+2): 2011-06-22 12:29:52
lstt09nk(金幣+2): 感謝交流 2011-06-22 17:23:10
小新3858(金幣+2): 2011-06-22 12:29:52
lstt09nk(金幣+2): 感謝交流 2011-06-22 17:23:10
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說(shuō)的有些不清楚哦 1.跑膠也是western的一部分哦，你的意思是說(shuō)膠用考染，轉(zhuǎn)膜后再染就看不到了吧。 2.轉(zhuǎn)膜后是用麗春紅染，你是用什么染的那？ 3.看不到東西，首先確定你轉(zhuǎn)膜是否成功，有沒有蛋白轉(zhuǎn)上去或者是轉(zhuǎn)過(guò)去了。 如果能說(shuō)的具體些，就更容易分析問(wèn)題了。  |
2樓2011-06-22 09:25:15
小新3858
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3樓2011-06-22 10:02:43
didillytao
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lstt09nk(金幣+2): 鼓勵(lì)交流 2011-06-22 17:23:37
lstt09nk(金幣+2): 鼓勵(lì)交流 2011-06-22 17:23:37
| 如果你能確定染出來(lái)的條帶是你要的話,那么應(yīng)該是western的轉(zhuǎn)膜,一抗,二抗,ecl中某個(gè)出了問(wèn)題.不知道你們是不是濕轉(zhuǎn),膜在半干的狀態(tài)下也能看到蛋白條帶,你可以看一看確定有沒有蛋白轉(zhuǎn)到膜上,還有就是一抗和二抗的驗(yàn)證,二抗直接滴在膜上加ECL顯色就可以驗(yàn)證好不好用,效價(jià)怎么樣,而一抗的話以前用過(guò)嗎?顯色是沒問(wèn)題的嗎?有沒有過(guò)期之類的,而且ECL底物發(fā)光時(shí)間是有時(shí)限的,有些比較靈敏的ECL發(fā)光時(shí)間很短,如果動(dòng)作慢可能熒光就會(huì)猝滅了,我覺得原因很多,樓主看一看哪項(xiàng)更有可能,希望能幫到你~~ |
5樓2011-06-22 10:16:36
zsy1106
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8樓2011-06-22 14:27:49
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9樓2011-06-23 09:12:02
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10樓2011-06-23 10:49:04
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