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yanhui8558金蟲 (小有名氣)
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[求助]
重疊pcr\跳躍pcr的問題
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我現在在進行重疊pcr，想要把一段基因中間的內含子去除，上游片段1600左右，下游片段500左右，先分別p出上下游片段，然后進行重疊延伸步驟。實驗條件如下： 中間上片段下引物和下片段上引物重疊區(qū)域大概50個bp，先不加入引物，讓上下游引物自連，用的是pcr混合物，pcr條件： 94度3分鐘，94度45秒，40度30秒，72度，1分40秒，72度10分鐘，2-4步循環(huán)10次，然后加入上片段上引物和下片段下引物，pcr條件： 94度3分鐘，94度45秒，50度30秒，72度，2分，72度10分鐘，2-4步循環(huán)30次. 延伸溫度也做過50-65的梯度，也加入過DMSO 試驗過， 可是一直沒有成功，忘各位大俠指導，或者可以指出可能是哪方面的問題啊，感激不盡  |
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4樓2011-06-23 20:40:36
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