 |
 |
 |
| 24小時(shí)熱門(mén)版塊排行榜 |
- >論壇更新日志 (4086)
- >導(dǎo)師招生 (624)
- >考研 (456)
- >文獻(xiàn)求助 (252)
- >蟲(chóng)友互識(shí) (148)
- >休閑灌水 (135)
- >考博 (118)
- >基金申請(qǐng) (98)
- >招聘信息布告欄 (65)
- >碩博家園 (47)
- >博后之家 (43)
- >綠色求助(高懸賞) (33)
- >論文投稿 (25)
- >SciFinder/Reaxys (18)
- >找工作 (18)
- >外文書(shū)籍求助 (12)
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 5 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 2929 | 回復(fù): 14 | ||
| 當(dāng)前只顯示滿足指定條件的回帖，點(diǎn)擊這里查看本話題的所有回帖 | ||
yanhui8558金蟲(chóng) (小有名氣)
|
[求助]
重疊pcr\跳躍pcr的問(wèn)題
|
|
|
我現(xiàn)在在進(jìn)行重疊pcr，想要把一段基因中間的內(nèi)含子去除，上游片段1600左右，下游片段500左右，先分別p出上下游片段，然后進(jìn)行重疊延伸步驟。實(shí)驗(yàn)條件如下： 中間上片段下引物和下片段上引物重疊區(qū)域大概50個(gè)bp，先不加入引物，讓上下游引物自連，用的是pcr混合物，pcr條件： 94度3分鐘，94度45秒，40度30秒，72度，1分40秒，72度10分鐘，2-4步循環(huán)10次，然后加入上片段上引物和下片段下引物，pcr條件： 94度3分鐘，94度45秒，50度30秒，72度，2分，72度10分鐘，2-4步循環(huán)30次. 延伸溫度也做過(guò)50-65的梯度，也加入過(guò)DMSO 試驗(yàn)過(guò)， 可是一直沒(méi)有成功，忘各位大俠指導(dǎo)，或者可以指出可能是哪方面的問(wèn)題啊，感激不盡  |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)中的趣事：實(shí)驗(yàn)器材的 “烏龍”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)中的趣事：和實(shí)驗(yàn)材料的 “斗智斗勇”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤(rùn)色/翻譯怎么收費(fèi)?
已經(jīng)有224人回復(fù)
-
蛋白質(zhì)檢測(cè)：精準(zhǔn)分析，解鎖生物分子的密碼
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之小鼠實(shí)驗(yàn)：嚴(yán)謹(jǐn)設(shè)計(jì)，解析生命機(jī)制的重要載體
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之重金屬檢測(cè)：精準(zhǔn)篩查，守護(hù)健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“蛙測(cè)重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標(biāo)南京
已經(jīng)有0人回復(fù)
» 本主題相關(guān)價(jià)值貼推薦，對(duì)您同樣有幫助:
- overlap PCR之問(wèn)題
已經(jīng)有16人回復(fù)
- 重疊PCR應(yīng)該怎么做？
已經(jīng)有9人回復(fù)
- 重疊延伸PCR設(shè)計(jì)引物
已經(jīng)有3人回復(fù)
- 重疊PCR克隆大片段
已經(jīng)有4人回復(fù)
- 如何設(shè)計(jì)重疊延伸PCR引物
已經(jīng)有14人回復(fù)
- 【求助/交流】重疊PCR問(wèn)題
已經(jīng)有12人回復(fù)
- 【求助/交流】重疊PCR的問(wèn)題???
已經(jīng)有7人回復(fù)
- 【求助/交流】重疊延伸pcr第二輪條帶較弱，彌散
已經(jīng)有12人回復(fù)
xujian568
至尊木蟲(chóng) (著名寫(xiě)手)
Count XU
- 應(yīng)助: 37 (小學(xué)生)
- 金幣: 10692.8
- 紅花: 7
- 帖子: 1319
- 在線: 561.7小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 336444
- 注冊(cè): 2007-04-01
- 專業(yè): 生物物理、生物化學(xué)與分子
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★
西瓜(金幣+3): 鼓勵(lì)交流 2011-06-29 10:54:14
西瓜(金幣+3): 鼓勵(lì)交流 2011-06-29 10:54:14
|
先提個(gè)問(wèn)題，樓主的基因已經(jīng)克隆到載體了么？ 如果長(zhǎng)的片段已經(jīng)克隆到載體，而且只需要去除一個(gè)內(nèi)含子的話，可以直接在你克隆好的載體的基礎(chǔ)上設(shè)計(jì)引物，反向擴(kuò)增，然后平末端連接�？赡芡嘶鸬臅r(shí)間有點(diǎn)長(zhǎng)，不過(guò)這樣應(yīng)該沒(méi)有問(wèn)題。 只是提個(gè)建議。  |
yanhui8558
9樓2011-06-29 09:47:01
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★
yanhui8558(金幣+1): 2011-06-23 17:01:15
西瓜(金幣+3): 鼓勵(lì)應(yīng)助 2011-06-23 19:20:26
yanhui8558(金幣+1): 2011-06-23 17:01:15
西瓜(金幣+3): 鼓勵(lì)應(yīng)助 2011-06-23 19:20:26
|
分段的上下片段都是PCR產(chǎn)物，濃度很高的，但是在第二輪的擴(kuò)增中其實(shí)就是個(gè)模板的作用，千萬(wàn)不要加太多了，加多了就把第二輪的引物全部飽和掉了，因?yàn)椴涣私饩唧w情況，也不好建議加多少，方便的話，做個(gè)梯度試試。 另外，分段的上下片段在做第二輪之前，稍微純化下，把第一次PCR之后的殘留引物，副產(chǎn)物什么的去掉，避免干擾第二輪的擴(kuò)增。 試試看吧！ |
2樓2011-06-23 16:53:04
yanhui8558
金蟲(chóng) (小有名氣)
- 應(yīng)助: 1 (幼兒園)
- 金幣: 1765
- 散金: 3
- 帖子: 172
- 在線: 66.7小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 660663
- 注冊(cè): 2008-11-23
- 性別: MM
- 專業(yè): 微生物生理與生物化學(xué)
3樓2011-06-23 17:00:32
gwbk
木蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
- MolEPI: 54
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 2293.5
- 紅花: 24
- 帖子: 529
- 在線: 186.9小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 1320681
- 注冊(cè): 2011-06-11
- 性別: GG
- 專業(yè): 生物化學(xué)
4樓2011-06-23 20:40:36
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 333求調(diào)劑 +6 | 87639 2026-03-21 | 10/500 |
|
|---|---|---|---|---|
|
|
[考研] 276求調(diào)劑 +3 | YNRYG 2026-03-21 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 323求調(diào)劑 +6 | 洼小桶 2026-03-18 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 311求調(diào)劑 +6 | 冬十三 2026-03-18 | 6/300 |
|
|
[考研] 一志愿 西北大學(xué) ，070300化學(xué)學(xué)碩，總分287，雙非一本，求調(diào)劑。 +3 | 晨昏線與星海 2026-03-20 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 298求調(diào)劑一志愿211 +3 | 上岸6666@ 2026-03-20 | 3/150 |
|
|
|
[基金申請(qǐng)] 山東省面上項(xiàng)目限額評(píng)審 +4 | 石瑞0426 2026-03-19 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 0703化學(xué)調(diào)劑 +4 | 妮妮ninicgb 2026-03-21 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 297求調(diào)劑 +11 | 戲精丹丹丹 2026-03-17 | 12/600 |
|
|
|
[考研] 313求調(diào)劑 +4 | 肆叁貳壹22 2026-03-19 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 336求調(diào)劑 +5 | rmc8866 2026-03-21 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑 +3 | 白QF 2026-03-21 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 初始318分求調(diào)劑（有工作經(jīng)驗(yàn)） +3 | 1911236844 2026-03-17 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 考研調(diào)劑求學(xué)校推薦 +3 | 伯樂(lè)29 2026-03-18 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 288求調(diào)劑 +16 | 于海海海海 2026-03-19 | 16/800 |
|
|
|
[考研] 一志愿 南京航空航天大學(xué)大學(xué) ，080500材料科學(xué)與工程學(xué)碩 +5 | @taotao 2026-03-20 | 5/250 |
|
|
|
[論文投稿]
申請(qǐng)回稿延期一個(gè)月，編輯同意了。但系統(tǒng)上的時(shí)間沒(méi)變，給編輯又寫(xiě)郵件了，沒(méi)回復(fù)
 10+3
|
wangf9518 2026-03-17 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 0854可跨調(diào)劑，一作一項(xiàng)核心論文五項(xiàng)專利，省、國(guó)級(jí)證書(shū)40+數(shù)一英一287 +8 | 小李0854 2026-03-16 | 8/400 |
|
|
|
[碩博家園] 湖北工業(yè)大學(xué) 生命科學(xué)與健康學(xué)院-課題組招收2026級(jí)食品/生物方向碩士 +3 | 1喜春8 2026-03-17 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 085601求調(diào)劑 +4 | Du.11 2026-03-16 | 4/200 |
|