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jinpeng_6118木蟲 (正式寫手)
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[交流]
BL21(DE3)表達(dá)脂肪酶重組質(zhì)粒，將菌體顏色偏白是是怎么回事 已有4人參與
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| 最近構(gòu)建了兩個(gè)脂肪酶重組質(zhì)粒，分別轉(zhuǎn)入BL21(DE3)中表達(dá)，誘導(dǎo)前菌體顏色一樣，加入終濃度0.1mM IPTG 15℃誘導(dǎo)24h后，離心菌體，其中一個(gè)的菌體顏色為正常的大腸桿菌色（顏色略偏淡黃些），而另一個(gè)菌體就偏白色了，破碎后不是那種呈澄清狀，而是有點(diǎn)呈乳白色，離心后沉淀比另一個(gè)多。這個(gè)質(zhì)粒已經(jīng)這樣搖過好幾次了，結(jié)果都是一樣，這次是重新連接后再轉(zhuǎn)了一次新買的BL21。兩只里同源性很高，跑過蛋白電泳，可溶性蛋白量差不多的。另外也排除染菌的可能了。請(qǐng)各位高手分析下什么原因。謝謝 |
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jinpeng_6118
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看天(金幣+5, BioEPI+1): 鼓勵(lì)交流 2011-12-21 12:43:24
看天(金幣+5, BioEPI+1): 鼓勵(lì)交流 2011-12-21 12:43:24
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你擴(kuò)增基因的時(shí)候用高保真性好的酶幾乎是不會(huì)突變的。我用PET21a表達(dá)的，BL21DE3，蛋白可溶性很大，還可以胞外分泌，酶活也很高的。其實(shí)與酶的本身性質(zhì)關(guān)系比較大，有的很好表達(dá)，有的就很難表達(dá)，我有很多條與我這條已  表達(dá)的同源性在60%以下，表達(dá)就全是包涵體，換酵母以及采用分子伴侶等方法也試過，幾乎可溶性都很低的，我覺得突變的話也可以，前段時(shí)間做過易錯(cuò)PCR，但覺得效果不太明顯 |
12樓2011-11-05 13:48:53
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3樓2011-06-30 00:27:58
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4樓2011-07-21 15:16:02
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6樓2011-07-21 20:15:58
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8樓2011-11-04 21:49:38
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