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[求助]
用LB培養(yǎng)BL21(DE3)菌體總是死亡，求助！ 已有8人參與
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我最近做原核表達(dá)，用BL21(DE3)，質(zhì)粒PET32，我用保存的菌株劃板、挑斑活化，用LB在37℃加氨芐培養(yǎng)，剛開始菌體擴(kuò)增，可是過兩個(gè)小時(shí)后總是死亡（由之前的乳黃狀變成帶渣滓的清澈狀）。我沒有加IPTG，只是純粹擴(kuò)增，最近總是這樣。 同時(shí)做的其他蛋白都這樣，而且之前做的挺好，說明不是毒蛋白的原因，而且活化的菌株應(yīng)該沒問題，因?yàn)閯傞_始我小量誘導(dǎo)很正常，四度保存過幾天慢慢就不好了。有時(shí)候剛剛挑的斑也會(huì)搖不起來。LB我們都不調(diào)pH，之前做的挺好，我換了各種公司的去離子水，應(yīng)該排除水質(zhì)問題。各位大蝦有沒有遇到過類似情況的。 |
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5樓2014-02-25 14:27:26
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