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用LB培養(yǎng)BL21(DE3)菌體總是死亡，求助！ 已有8人參與
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我最近做原核表達(dá)，用BL21(DE3)，質(zhì)粒PET32，我用保存的菌株劃板、挑斑活化，用LB在37℃加氨芐培養(yǎng)，剛開(kāi)始菌體擴(kuò)增，可是過(guò)兩個(gè)小時(shí)后總是死亡（由之前的乳黃狀變成帶渣滓的清澈狀）。我沒(méi)有加IPTG，只是純粹擴(kuò)增，最近總是這樣。 同時(shí)做的其他蛋白都這樣，而且之前做的挺好，說(shuō)明不是毒蛋白的原因，而且活化的菌株應(yīng)該沒(méi)問(wèn)題，因?yàn)閯傞_(kāi)始我小量誘導(dǎo)很正常，四度保存過(guò)幾天慢慢就不好了。有時(shí)候剛剛挑的斑也會(huì)搖不起來(lái)。LB我們都不調(diào)pH，之前做的挺好，我換了各種公司的去離子水，應(yīng)該排除水質(zhì)問(wèn)題。各位大蝦有沒(méi)有遇到過(guò)類(lèi)似情況的。 |
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