 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 15 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 3751 | 回復: 14 | |||
| 本帖產生 2 個 BioEPI ，點擊這里進行查看 | |||
[交流]
電泳-分離膠凝得很慢！！
|
|||
|
各位蟲友和老師，小蟲是鮮嫩菜鳥，剛剛開始SDS-PAGE電泳。配制分離膠是10%的：三重水3.3ml，30%丙烯酰胺4ml，1.5mo/Ll Tris-HCl（pH 8.8） 2.5 ml，10%SDS 0.1ml，10% 過硫酸銨 0.1ml，TEMED 0.004 ml。制膠時幾個小時都不凝，這是什么原因？是不是可以這樣考慮： 1、30%丙烯酰胺中必須加甲叉雙丙烯酰胺？好多資料顯示需要加甲叉雙丙烯酰胺，但我參照的是Bio-Rad提供的配制方法啊？郁悶。 2、按照老師的指點說，加膠后，等小燒杯里的膠開始凝，玻璃板中的膠就應該凝了�？墒菫槭裁磶讉�小時才開始凝？我試著增加了過硫酸銨和TEMED的用量，凝結的速度倒是很快，不知道這樣影響結果不？ 3、即使膠凝結之后，我發(fā)現(xiàn)其硬度不夠大，會給后期帶來不便？怎么辦？ 3、可不可以考慮換種分離膠的配方？希望蟲友提供建議。 希望論壇內的筒子們多給建議，萬分感謝！ |
回復此樓» 猜你喜歡
284求調劑
已經有10人回復
-
一志愿山東大學藥學學碩求調劑
已經有4人回復
-
07化學280分求調劑
已經有4人回復
-
298-一志愿中國農業(yè)大學-求調劑
已經有12人回復
-
求材料，環(huán)境專業(yè)調劑
已經有3人回復
-
335求調劑
已經有5人回復
-
求調劑
已經有7人回復
-
一志愿吉大化學322求調劑
已經有4人回復
-
環(huán)境學碩288求調劑
已經有8人回復
-
341求調劑(一志愿湖南大學070300)
已經有6人回復
» 本主題相關價值貼推薦，對您同樣有幫助:
- 瓊脂糖凝膠電泳跑的時間長了是不是就會出現(xiàn)拖尾呀？
已經有10人回復
- SDS-PAGE 電泳分離膠發(fā)白什么原因？
已經有13人回復
- 【資料】聚丙烯酰胺凝膠電泳分離蛋白質技術實驗分析
已經有125人回復
- 聚丙烯酰胺凝膠電泳
已經有7人回復
- SDS-page 分離膠不凝固
已經有19人回復
- 求助mRNA分離和凝膠電泳
已經有3人回復
- 大家?guī)兔匆幌拢闷婀郑业碾娪緢D，三個加樣孔在分離膠合在一起了
已經有7人回復
- 聚丙烯酰胺凝膠電泳灌膠后能放多久
已經有17人回復
- PAGE凝膠蛋白電泳用（梳孔有殘留膠）
已經有15人回復
- 【求助/交流】怎么樣跑瓊脂糖凝膠電泳 能將250bp 和290 bp的片段分離
已經有28人回復
- 【求助/交流】SDS-PAGE電泳分離膠和濃縮膠濃度問題
已經有11人回復
- 【請教】量子點與抗體連接后，用SDS電泳確定連接時，量子點無法進入分離膠。。。
已經有20人回復
- 【求助/交流】凝膠電泳時如何分開大小相差10-20個堿基對的目的條帶
已經有4人回復
- 【求助/交流】電泳分離膠pH的問題
已經有6人回復
» 搶金幣啦！回帖就可以得到:
-
94年女征男友
+1/271
-
祈福中標
+1/231
-
求助紫外可見分光光度計
+1/99
-
國自然面上祈福
+1/81
-
祈福2026國基面上項目
+5/80
-
【全額獎學金+英國博士學位】國科大杭高院Nathan課題組招收2026級聯(lián)培博士生1名！
+1/49
-
中國藥科大學211-課題組招收2026博士/碩士-有機化學合成-26年9月入學（還有名額）
+1/48
-
吲哚美辛原料藥合成交流
+1/34
-
招收從事大氣復合污染成因領域研究生
+1/14
-
招聘科研助理——儲能方向（儲能、流體傳熱、CFD模擬）
+1/13
-
【博士招生】武漢科技大學招收材料、化工、環(huán)境、冶金類2026年“申請-考核”制博士生
+1/10
-
【2026考研調劑】南方科技大學-深圳理工大學聯(lián)培 086000 免疫方向(26.9入學)
+1/9
-
北京航空航天大學招生微流控與智能打印技術方向博士研究生
+2/8
-
南開大學陳樹琪教授研究團隊招收2026級超構材料方向博士研究生
+1/8
-
福建師范大學環(huán)境與資源學院招收2026級碩士生
+1/6
-
調劑 22408 340分
+1/4
-
上海交通大學招聘：新型X射線管設計仿真計算工程師/博士后/助理研究員
+1/4
-
天津工業(yè)大學雙一流高校招博士、碩士、博士后
+1/3
-
香港中文大學化學系吳基培教授招募2026年秋季（2026年8月1日）入學全獎博士研究生
+1/2
-
武漢紡織大學紡織纖維及制品教育部重點實驗室招收博士研究生
+1/1
2樓2011-06-30 17:56:28
4樓2011-06-30 19:10:49
★ ★ ★ ★
小木蟲(金幣+0.5):給個紅包，謝謝回帖
看天(金幣+3): 鼓勵回答 2011-06-30 23:10:02
lizhijiang(金幣+1): 多謝你！ 2011-07-01 08:13:25
silicare(EPI+1): 2011-07-02 14:46:27
小木蟲(金幣+0.5):給個紅包，謝謝回帖
看天(金幣+3): 鼓勵回答 2011-06-30 23:10:02
lizhijiang(金幣+1): 多謝你！ 2011-07-01 08:13:25
silicare(EPI+1): 2011-07-02 14:46:27
|
1。如樓上所說，甲叉雙丙烯酰胺是必須加的，形成網絡的重要組成 2。TEMED多加肯定凝的快，無甚影響，最怕加太多還沒灌膠就凝了就不好了。 3。說實話，不知道你的沒加甲叉的膠是怎么凝的！你說的多軟沒概念…… 3。膠的配方是全部一樣的，唯一的不同就是30%濃縮膠的用量不同，換配方的事情就不要想了 |
5樓2011-06-30 22:45:09
★
小木蟲(金幣+0.5):給個紅包，謝謝回帖
lizhijiang(金幣+2): 嚴重同意：以前我們實驗室有人加入APS后不立即混勻就加入TEMED，之后也不混勻就加入膠板中，也會造成凝膠緩慢，或者凝膠不均勻的情況，樓主需要注意一下。 2011-07-01 08:14:01
小木蟲(金幣+0.5):給個紅包，謝謝回帖
lizhijiang(金幣+2): 嚴重同意：以前我們實驗室有人加入APS后不立即混勻就加入TEMED，之后也不混勻就加入膠板中，也會造成凝膠緩慢，或者凝膠不均勻的情況，樓主需要注意一下。 2011-07-01 08:14:01
|
同意樓上的看法。 另外，還需要注意配膠的溫度，一般夏天可以按這個比例加TEMED，冬天溫度低就可以適當多加點。 一般我們不多加過硫酸銨APS。 你可以不用自己配制30%的丙烯酰胺，我們都是用的買的，很多公司有賣，比如上海生工，500ml要100多元吧，還很好用。不接觸粉末丙烯酰胺，對我們來說可以減少受其毒害。 還需要說明的一點，以前我們實驗室有人加入APS后不立即混勻就加入TEMED，之后也不混勻就加入膠板中，也會造成凝膠緩慢，或者凝膠不均勻的情況，樓主需要注意一下。 [ Last edited by toxicpeach on 2011-6-30 at 23:49 ] |
6樓2011-06-30 23:47:10
7樓2011-07-01 00:36:40
8樓2011-07-01 09:05:47
9樓2011-07-01 09:36:50
10樓2011-07-01 13:16:44
11樓2011-07-01 19:00:08
注意試劑別加漏了 12樓2011-07-30 13:41:12
13樓2011-07-31 15:09:36
14樓2011-08-18 23:46:23
15樓2013-05-02 21:53:08
簡單回復
bhj5603樓
2011-06-30 18:07
回復
相關版塊跳轉
我要訂閱樓主 lizhijiang 的主題更新
| 15 | 1/1 | 返回列表 |
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 327求調劑 +5 | prayer13 2026-03-23 | 5/250 |
|
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 生物學學碩求調劑 +4 | 小羊睡著了? 2026-03-23 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 生物學一志愿985，分數349求調劑 +6 | zxts12 2026-03-21 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 求調劑一志愿武漢理工大學材料工程（085601） +3 | WW.' 2026-03-23 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 一志愿南京理工大學085701資源與環(huán)境302分求調劑 +5 | 葵梓衛(wèi)隊 2026-03-18 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 生物學071000 329分求調劑 +5 | 我愛生物生物愛?/a> 2026-03-17 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 324求調劑 +6 | lucky呀呀呀鴨 2026-03-20 | 6/300 |
|
|
|
[考博] 招收博士1-2人 +3 | QGZDSYS 2026-03-18 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 0805 316求調劑 +3 | 大雪深藏 2026-03-18 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 299求調劑 +5 | shxchem 2026-03-20 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 材料與化工（0856）304求 B區(qū) 調劑 +3 | 邱gl 2026-03-21 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 22 350 本科985求調劑，求老登收留 +3 | 李軼男003 2026-03-20 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 求調劑 +3 | Ma_xt 2026-03-17 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 一志愿華中科技大學，080502，354分求調劑 +5 | 守候夕陽CF 2026-03-18 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 330求調劑 +4 | 小材化本科 2026-03-18 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 一志愿西南交通 專碩 材料355 本科雙非 求調劑 +5 | 西南交通專材355 2026-03-19 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 一志愿西安交通大學 學碩 354求調劑211或者雙一流 +3 | 我想要讀研究生 2026-03-20 | 3/150 |
|
|
|
[考博] 申博26年 +3 | 八6八68 2026-03-19 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 288求調劑，一志愿華南理工大學071005 +5 | ioodiiij 2026-03-17 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 085600材料與化工求調劑 +6 | 緒幸與子 2026-03-17 | 6/300 |
|