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[求助]
提質(zhì)粒濃度太小，條帶不亮，有圖求真相
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RT 之前一切都正常，現(xiàn)在無(wú)法重現(xiàn)  1 ml菌液，提完質(zhì)粒50ul定容，上樣2ul。如圖 曾經(jīng)試過(guò)多次轉(zhuǎn)接；質(zhì)粒重新轉(zhuǎn)化新的DH5a；OD=1時(shí)添加氯霉素等方法，仍然很淡。  難道原因是搖床和LB？  求真相  |
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2樓2011-07-03 14:56:18
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【答案】應(yīng)助回帖
scelab(金幣+6): :arm: 2011-07-03 15:05:47
1949stone(EPI+1): epi 2011-07-03 18:09:26
scelab(金幣+2): 把錢(qián)發(fā)光~ 2011-07-04 10:43:15
1949stone(EPI+1): epi 2011-07-03 18:09:26
scelab(金幣+2): 把錢(qián)發(fā)光~ 2011-07-04 10:43:15
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你這圖照反了吧？ 這不是有條帶呢嗎？有就可以說(shuō)明問(wèn)題呀，關(guān)鍵看你是否要進(jìn)行下游操作了，如果單單看一下大小，那完全可以了，不過(guò)可以看出來(lái)你這是手提的質(zhì)粒，不然底下怎么那么多的RNA呢？以后可以提完質(zhì)粒之后加一點(diǎn)RNA酶，放置十幾分鐘再點(diǎn)樣。。。 為什么不用試劑盒提呢？你這手提產(chǎn)量太低了。。。一般來(lái)說(shuō)手提雜質(zhì)雖然多，可是量很大的。。。 你是做什么實(shí)驗(yàn)?zāi)�？目的是。。。�? |
3樓2011-07-03 14:59:24
scelab
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4樓2011-07-03 15:02:37
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5樓2011-07-03 15:05:09
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6樓2011-07-03 15:05:21
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9樓2011-07-03 15:40:43
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dhd997(金幣+5, EPI+1): 2011-07-03 18:08:40
1949stone(EPI-1): 很謙虛 2011-07-03 21:04:17
dhd997(金幣+5, EPI+1): 2011-07-03 18:08:40
1949stone(EPI-1): 很謙虛 2011-07-03 21:04:17
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那是不是抗生素失效了？沒(méi)有選擇壓力的時(shí)候質(zhì)粒不擴(kuò)增的。似乎隱約是有兩條帶，還隔得挺遠(yuǎn)的，莫非是兩個(gè)質(zhì)粒？DH5a用來(lái)表達(dá)？ 如果用4毫升菌液，我覺(jué)得質(zhì)粒的量應(yīng)該會(huì)增多的，溶液123容量看著變化就行了。不增加用量也行，關(guān)鍵是看溶液2能不能使得菌液澄清，澄清了就表示足夠保證效果了。 你的質(zhì)粒那么小，外源看起來(lái)也不大，加一個(gè)M，1kb就行了，右邊還加一個(gè)，浪費(fèi)了。膠底下氣泡N多，放膠的時(shí)候膠不要太干，放得溫柔一點(diǎn)就沒(méi)有了，從一側(cè)放下去。還有我覺(jué)得RNA這么遠(yuǎn)，不會(huì)掩蓋質(zhì)粒的，質(zhì)粒要達(dá)到被掩蓋的程度，那RNA也太多了，或者說(shuō)質(zhì)粒也太小，才1KB左右才會(huì)跟RNA混，你的質(zhì)粒沒(méi)那么小。 |
10樓2011-07-03 16:20:25
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