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[求助] 白鼠骨髓細(xì)胞培養(yǎng)的一個(gè)問(wèn)題，棘手！

從四周雌性白鼠脛骨中取得細(xì)胞，培養(yǎng)6天后顯微鏡下觀察飽和度為70-80%，大部分貼壁完好，有少量圓形、懸浮細(xì)胞。更換培養(yǎng)培養(yǎng)液時(shí)，先用PBS沖洗2次然后加入新鮮培養(yǎng)液，重新放到顯微鏡下觀察時(shí)發(fā)現(xiàn)：90%的細(xì)胞變成圓形，而且?guī)缀鯊呐囵B(yǎng)皿底部脫離，而且細(xì)胞數(shù)目比換培養(yǎng)液前少了很多。
這時(shí)什么原因呢？
本打算明天接種細(xì)胞到試樣上，看來(lái)不行了！
有類(lèi)似經(jīng)歷的蟲(chóng)友嗎？
可以保證PBS和培養(yǎng)液沒(méi)有問(wèn)題。

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1樓 2011-07-04 13:57:07

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黃昏過(guò)客

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lixiangde(金幣+1): 感謝回帖交流 2011-07-05 11:05:20

培養(yǎng)到六天才換液的？估計(jì)是分泌物過(guò)多，細(xì)胞貼壁不是很好吧，一洗就下來(lái)了，猜測(cè)哈，小蝦米期待大俠的解答

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從小與世抗?fàn)帲瑹o(wú)奈輪回難過(guò)

2樓2011-07-04 15:12:43

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westlover

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引用回帖:

Originally posted by 黃昏過(guò)客 at 2011-07-04 15:12:43:
培養(yǎng)到六天才換液的？估計(jì)是分泌物過(guò)多，細(xì)胞貼壁不是很好吧，一洗就下來(lái)了，猜測(cè)哈，小蝦米期待大俠的解答

sorry，忘了說(shuō)了，3天的時(shí)候也換過(guò)一次，當(dāng)時(shí)也是細(xì)胞都浮起來(lái)了。

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3樓2011-07-04 16:36:12

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lixiangde(金幣+1): 感謝回帖交流 2011-07-05 11:05:40

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Originally posted by westlover at 2011-07-04 16:36:12:
sorry，忘了說(shuō)了，3天的時(shí)候也換過(guò)一次，當(dāng)時(shí)也是細(xì)胞都浮起來(lái)了。

如果那樣的話，個(gè)人覺(jué)得那應(yīng)該是細(xì)胞的問(wèn)題，細(xì)胞貼壁效果不好。

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從小與世抗?fàn)�，無(wú)奈輪回難過(guò)

4樓2011-07-04 17:04:59

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jingwang7793

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lixiangde(金幣+1): 感謝回帖交流 2011-07-05 11:05:29

骨髓中細(xì)胞種類(lèi)很多，要清楚你得到的是那種細(xì)胞。

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JingWang

5樓2011-07-05 04:47:34

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Originally posted by jingwang7793 at 2011-07-05 04:47:34:
骨髓中細(xì)胞種類(lèi)很多，要清楚你得到的是那種細(xì)胞。

對(duì)此我也不甚了了，培養(yǎng)液中沒(méi)有添加分化誘導(dǎo)藥物，師兄說(shuō)，換過(guò)幾次培養(yǎng)液后，懸浮細(xì)胞基本會(huì)被清洗出去，貼壁的細(xì)胞就會(huì)是造骨細(xì)胞，我也不清楚……

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6樓2011-07-05 08:47:52

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Originally posted by 黃昏過(guò)客 at 2011-07-04 17:04:59:
如果那樣的話，個(gè)人覺(jué)得那應(yīng)該是細(xì)胞的問(wèn)題，細(xì)胞貼壁效果不好。

是嗎？可是別人從骨髓細(xì)胞里得出的貼壁細(xì)胞貼壁很好啊，換培養(yǎng)液的時(shí)候并不會(huì)從培養(yǎng)皿底部脫離。還能測(cè)試3小時(shí)附著率，3小時(shí)細(xì)胞形態(tài)等等，如果我的細(xì)胞貼壁不好，3小時(shí)后就算在試樣表面鋪展的很好，也會(huì)被PBS沖洗掉的吧？那就太郁悶了！今天是培養(yǎng)的第七天，應(yīng)該接種了，也不知道是不是好些了。

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7樓2011-07-05 08:51:56

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Originally posted by 黃昏過(guò)客 at 2011-07-04 17:04:59:
如果那樣的話，個(gè)人覺(jué)得那應(yīng)該是細(xì)胞的問(wèn)題，細(xì)胞貼壁效果不好。

今天打算給它傳代一下，看看細(xì)胞在新的培養(yǎng)皿中能不能牢固貼壁，那樣，種植的時(shí)候骨髓細(xì)胞就是第二代了，唉，不完美，文獻(xiàn)中都是培養(yǎng)七天后直接種植。

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8樓2011-07-05 08:56:55

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你好，有做和骨有關(guān)的研究嗎？你是否有機(jī)會(huì)申請(qǐng)到國(guó)家公派的名額？我們美國(guó)這邊有個(gè)國(guó)內(nèi)訪問(wèn)學(xué)者或博士生聯(lián)合培養(yǎng)的位置。如果感興趣請(qǐng)和我聯(lián)系。Email: fengdj100@hotmail.com 謝謝。德江

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9樓2012-07-29 22:43:40

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謝謝啦，真心地。我現(xiàn)在在日本是公派的讀博，做的是骨內(nèi)植入鈦合金表面處理，明年7月畢業(yè)呢。希望到時(shí)候你那邊的職位還在。對(duì)了，似乎那個(gè)職位不提供獎(jiǎng)學(xué)金吧？

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10樓2012-07-30 07:50:21

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